C - 192
Laboratorio de Microbiología Oral. Escuela de Estomatología. Facultad de Medicina. Universidad de Oviedo. E-mail: jffierro@uniovi.es
Introducción. Candida albicans causa un gran número de infecciones fúngicas particularmente graves en pacientes inmunocomprometidos. La proliferación de C. albicans en mucosas es controlada por varios factores, entre ellos algunos componentes de la inmunidad innata. Uno de ellos, lactoferrina (Lf), es una proteína del grupo de las transferrinas que posee gran afinidad por iones Fe (3+). Recientemente hemos publicado las condiciones fisiológicas óptimas de C. albicans para la actividad candidacida de lactoferrina (1, 2). Ahora mostramos algunos cambios intracelulares inducidos por esta proteína que son similares a los observados en el proceso de muerte celular programada de las levaduras.
Métodos. La exposición de fosfatidilserina en esferoplastos fue detectada con annexin V. La degradación de ADN se evaluó mediante la técnica de marcaje (TUNEL). La tinción DAPI fue utilizada para determinar la fragmentación nuclear, y con dihydrorhodamine (DHR)-123 se estudió la formación de radicales libres. Las células expuestas a sondas fluorescentes fueron analizadas por citometría y microscopía de fluorescencia.
Resultados. Protoplastos expuestos a concentraciones candidacidas de lactoferrina y tratados con annexin V mostraron fluorescencia períférica (20-35%), indicando externalización de fosfatidilserina. Células incubadas con Lf mostraron un fenotipo TUNEL-positivo (40-55%) sugiriendo una rotura masiva de ADN. La tinción con DAPI mostró células con imágenes semianulares típicas. El 50% de las células tratadas con Lf presentaron fluorescencia positiva intracelular para la sonda dihydrorhodamine (DHR)-123, indicativa de la formación intracelular de radicales libres. No se observó el patrón `DNA ladder´ al analizar el ADN cromosómico mediante electroforesis en geles de agarosa. Discusión. Aunque se desconoce el mecanismo de la acción microbicida de lactoferrina, resultados previos de nuestro grupo muestran una actividad no permeabilizadora de la membrana citoplasmática y una posible interacción con un receptor de la superficie celular. Los datos obtenidos muestran que lactoferrina, un componente de la inmunidad innata, puede inducir un proceso de muerte celular no lítico y similar a la apoptosis celular en C. albicans.
Referencias.
1. Modulation of in vitro fungicidal activity of human lactoferrin on Candida albicans by extracelluar cation concentration and target cell metabolic activity. 2004. M. Viejo-Díaz, M.T. Andrés, and J.F. Fierro. Antimicrob. Agents Chemother. 48:1242-1248.
2. Effects of human lactoferrin on the cytoplasmic membrane of Candida albicans cells related with its candidacidal activity. 2004. M. Viejo-Díaz, M.T. Andrés, and J.F. Fierro. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 42(2):181-185.