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1Instituto de Ingeniería del Agua y Medio Ambiente y 2Departamento de Biotecnología, Universidad Politécnica, Camino de Vera 14, 46022 Valencia; e-mail: jalonso@ihdr.upv.es
La bacteria filamentosa N. limicola se aisló por primera vez de fangos activos, y se describió como Gram-positiva, con forma de cocos en cadenas, con crecimiento lento, no móvil. Se han descrito tres morfotipos de N. limicola (I, II, III) en función de las dimensiones celulares, con N. limicola I como el más pequeño y N. limicola III como el más grande. Inicialmente se pensaba que serían la misma especie con diferentes tamaños celulares. La caracterización e identificación de N. limicola I, II y III se lleva a cabo en las plantas depuradoras a partir de características morfológicas y tinciones diferenciales (Gram y Neisser). Esta rutina de trabajo no corresponde a una clasificación sistemática, sino simplemente de tipo morfológico. El objetivo del presente trabajo es utilizar la técnica de hibridación in situ (FISH) para la identificación de los morfotipos filamentosos N. limicola I, II y II en los rectores biológicos de plantas biológicas depuradoras de aguas residuales con el sistema de fangos activos.
Se han tomado muestras de los reactores biológicos de 20 plantas depuradoras de la Comunidad Valenciana con problemas de espumas de origen biológico y esponjamiento de fangos. Las sondas utilizadas para la identificación de los morfotipos de N. limicola I, II y III han sido: N. limicola I sonda NLIMI 91; N. limicola II sondas AHW 183, Noli 644, NLIMII 192 y NMLIM 175; N. limicola III sondas NLIMIII 301, MLIMIII 792 y NLIMIII 830. Otras sondas FISH utilizadas han sido: EUB 338 I, EUB 338 II, HGC69a, LGC 354A, 354B, 354C y ALF 1b. Las células de N. limicola I se han incubado con lisozima a 4º C durante 10 minutos. Las hibridaciones se han realizado a 46ºC durante 1.5 h.
Con la técnica FISH se han identificado morfotipos de N. limicola en cinco phylum diferentes. N. limicola I: phylum Firmicutes (10 depuradoras). N. limicola II: Proteobacteria (5 depuradoras), Actinobacteria (7 depuradoras) y Chloroflexi (1 depuradora). N. limicola III: Planctomycetes (2 depuradoras). Los morfotipos N. limicola I, II y III se asocian con bajas cargas másicas, déficit de nutrientes (fósforo, nitrógeno) y niveles bajos de O2 disuelto. Sin embargo los resultados obtenidos demuestran que los morfotipos N. limicola I, II y III pueden corresponder a varias especies de bacterias, con características fisiológicas y ecológicas diferentes y por tanto establecer medidas de control de estos morfotipos en función solo de sus características morfológicas puede ser arriesgado.
Agradecimientos: Este proyecto ha sido financiado por la Entidad de Saneamiento de Aguas de la Comunidad Valenciana