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Detección de Cryptosporidium en aguas y fangos de EDARs de la Comunidad Valenciana mediante IMS/IFA y PCR

Amorós, I.1, Navarro1, M.D., Bernácer I.2 y Alonso, J.L.1

1Instituto de Ingeniería del Agua y Medio Ambiente, Universidad Politécnica, Camino de Vera 14, 46022, Valencia y 2Entidad de Saneamiento de Aguas; e-mail: iamoros@ihdr.upv.es

La reutilización del agua residual es una necesidad que se viene planteando desde hace años, al menos para algunos fines concretos, y así racionalizar las reservas de agua destinándolas a actividades de primera necesidad (OMS,1989). Los fangos procedentes de plantas de tratamiento biológico pueden ser utilizados, una vez tratados, como fertilizantes o mejorantes de los suelos. Cryptosporidium es un protozoo patógeno que puede estar presente en las aguas y fangos, responsable en los últimos años de numerosos brotes de criptosporidiosis.

El objetivo de nuestro estudio es investigar la presencia de ooquistes de Cryptosporidium en los afluentes de las depuradoras y en los efluentes tratados, para determinar por una parte la eficiencia del tratamiento utilizado, y por otra los niveles de ooquistes que pueden contener las aguas residuales tratadas. Del mismo modo, los fangos activos responsables del tratamiento biológico también han sido objeto de estudio para determinar los niveles de ooquistes que se encuentran antes y después del tratamiento de los mismos. El estudio fue llevado a cabo a lo largo de un año, en 5 plantas de tratamiento biológico, con diferente procesado de los fangos (digestión anaerobia, digestión aerobia, estabilización con cal, estabilización térmica, aireación prolongada) y en una planta de compostaje.

Un total de 44 muestras de agua residual bruta y tratada y 60 muestras de fangos antes y después de su tratamiento han sido analizadas para determinar la presencia de ooquistes de Cryptosporidium mediante IMS/IFA. Un volumen de 50-100 ml de agua residual bruta y 800 ml de agua residual tratada fueron concentradas por centrifugación. En el caso de los fangos se pesó 1 gramo de fango, se resuspendió en PBS 1X, se dejó sedimentar y el sobrenadante se concentró por centrifugación. Para la PCR se utilizaron 2 kits comerciales de extracción de DNA (MoBio). En el caso de la PCR simple se ha utilizado el par de iniciadores SB012. Para las 2 PCRs anidadas, los pares de iniciadores utilizados han sido KJL/CPB DIAG y SSU1/SSU2.

Mediante la técnica IMS/IFA se han observado ooquistes de Cryptosporidium en todos los afluentes, con valores que oscilan entre 10.100 y 80 ooquistes por litro, mientras que en los efluentes el número de ooquistes detectado ha estado entre 100 y 0 por litro. Los valores de ooquistes observados en los fangos tratados, han sido superiores a los de los fangos antes del tratamiento en 15 de los 25 muestreos realizados, excepto en la planta de compostaje en la que el número de ooquistes en el fango tratado (compost) ha sido 0 en todos los muestreos. Mediante PCR simple, han sido analizadas 26 muestras de aguas, de las cuales 10 (8 afluentes y 2 efluentes) fueron positivos (38, 46%), y 57 de fangos, de las que 19 (9 antes del tratamiento y 10 después) han dado positivo (33,33%). No se ha detectado Cryptosporidium en ninguna muestra mediante PCR anidada por lo que no se han podido determinar los genotipos.

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