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Departamento de Microbiología y Parasitología Sanitarias. Facultad de Farmacia Universidad de Barcelona. Avd. Juan XXIII s/n 08028 Barcelona.1 Servicios Cientifico-Técnicos de la Universidad de Barcelona. Correo electrónico: mnevot@yahoo.es
La Antártida es un ecosistema que ha centrado el interés de numerosos estudios científicos en los últimos años debido a la presencia de nuevos microorganismos con potenciales nuevas aplicaciones en el campo de la biotecnología. Nuestro grupo ha descrito recientemente nuevas especies pertenecientes a diversos grupos taxonómicos. Pseudoalteromonas antarctica NF3 es una bacteria Gram-negativa, psicrotrofa que produce un abundante material exopolimérico con interesantes propiedades
El objetivo del presente estudio ha sido aplicar la técnica de criofijación por alta presión y criosustitución para analizar a nivel ultrastructural el material extracelular producido por P. antarctica NF3. El elevado contenido en agua de los biopolímeros bacterianos impide su correcta visualización mediante las técnicas convencionales de fijación química y deshidratación a alta temperatura, pudiéndose visualizar únicamente con tratamientos previos de estabilización como la utilización de un antisuero específico. Mediante la criofijación por alta presión se inmovilizan los componentes celulares a muy bajas temperaturas y gran velocidad, solidificando el agua presente en la muestra de manera que se evita la formación de cristales de hielo que podrían dañar su estructura y se consigue mantener su disposición natural.
La observación por microscopía electrónica de transmisión de cortes ultrafinos de P. antarctica NF3 procesada por criofijación por alta presión y criosustitución han permitido visualizar el material extracelular y mostrar que está integrado por distintos componentes. Por un lado se aprecia un halo adherido a la superficie celular constituido por fibras dispuestas perpendicularmente a ella. Esta estructura fibrilar se extiende más allá del halo formando una red más dispersa. Por otra parte destaca la presencia de una gran cantidad de estructuras globulares rodeadas por una bicapa, semejantes a las vesículas de membrana descritas en otras bacterias Gram-negativas.
La clara mejora técnica que introduce la criofijación por alta presión y criosustitución en la visualización de biopolímeros bacterianos respecto a los métodos convencionales, nos ha permitido analizar la ultraestructura del material extracelular de P. antarctica y en futuros estudios asignar la composición y propiedades de modo correcto a los distintos componentes observados.
Agradecimientos:
Agradecemos la ayuda de los Servicios Científico-Técnicos de la Universidad de Barcelona, así como la beca recibida por M. Nevot de la Fundación Agustí Pedro Pons. Este trabajo ha sido en parte subvencionado por la Agència de Gestió d’Ajuts Universitaris i de Recerca de la Generalitat de Catalunya (Proyecto No. 2001/SGR/00126).