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Posgrado en Ciencias Ambientales1, CICM2, Facultad de Ciencias Químicas3 de la Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, México. Depto de Microbiología e Inmunología de la Universidad de Arizona en Tucson, USA4. Ciudad Universitaria edif. 76 complejo de Ciencias, tercer piso Ciudad Universitaria, CICM-ICBUAP, tel (222) 233 20 10 ext.22 ó 12, fax (222) 229 56 50, correo electrónico favelinoflores@yahoo.com
Las enfermedades diarreicas siguen siendo un problema de salud en países en desarrollo, porque el 70 % de las muertes de niños menores de 5 años son por esta causa (OMS); siendo EPEC uno de los principales agentes causales. Un factor de virulencia de EPEC importante es el flagelo, que ayuda a la bacteria a desplazarse y realizar movimientos dirigidos, dicho apéndice ha sido involucardo en la formación de biopelículas a superficies inertes, contribuyendo esto a la permanencia del mismo en alcantarillado y agua potable de mala calidad. Esta última suele tener microorganismos y concentraciones elevadas de metales pesados, entre otros. El propósito de este proyecto fue investigar al flagelo como un factor que le permite a la bacteria sobrevivir, desarrollarse y reproducirse en presencia de metales pesados.
El objetivo de este trabajo fue determinar como la presencia de los metales pesados (Hg, Pb, Zn, Cu, Cd, Fe y Cr ) influyen en la transcripción y expresión del flagelo de EPEC (E2348/69). Para este proyecto se transformaron las cepas EPEC silvestre (E2348/69), AGT01 (mutante de flagelo) y la DH5a (K-12), con la fusión transcripcional (promotor fliC con el operón lacZ). Las cepas obtenidas se crecieron en caldo LB durante 24 horas, se hicieron diluciones 1:100, se crecieron por 4 horas y se determinó la producción de b-galactosidasa. Para determinar la expresión de flagelina se usaron cultivos bacterianos a una OD600=1 de los que se prepararon extractos de bacteria completa por desnaturalización en buffer de muestra para SDS-PAGE, serealizó inmunoelectrotransferencia y las proteínas se reaccionaron con anticuerpos anti-flagelo y conjugado anti-IgG de conejo acoplado a peroxidasa. Los ensayos de motilidad se hicieron en agar LB al 0.25%. Se demostró que la presencia de algunos metales no afectaron significativamente el crecimiento bacteriano, excepto Hg y Pb. Con Zn, Cu, Cd y Cr la expresión flagelar fue proporcional a la transcripción. La movilidad coincide con la expresión flagelar en presencia de Zn, Cu, Cd y Fe. La transcripción de flagelo se afectó de forma similar para todos los metales excepto para Pb.
La presencia de metales pesados no afecta significativamente el crecimiento bacteriano pero si la transcripción y expresión de flagelina así como la movilidad de EPEC.