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Departamento de Microbiología II. Facultad de Farmacia. Universidad Complutense. 28040-Madrid. Spain. E-mail: mjmarinc@farm.ucm.es
Las rutas de transducción de señales mediadas por MAP quinasas (MAPKs) son esenciales en la fisiología de las células eucarióticas. Uno de los principales puntos de control en estas rutas son las propias MAPKs. En ellas convergen tanto quinasas activadoras (MAPK quinasas) como reguladores negativos, las proteín fosfatasas. Serín treonín fosfatasas, tirosín fosfatasas y fosfatasas de especificad dual (DSPs), estas últimas capaces de eliminar grupos fosfatos tanto en Ser/Thr como en Tyr, desfosforilan el dominio de activación de MAPKs, desactivándolas. Si bien se han identificado diversas fosfatasas que actúan sobre MAPKs en S. cerevisiae, aún se desconoce tanto el impacto real de su acción en la señalización como muchos de los mecanismos moleculares que operan en su regulación.
La DSP Msg5 regula negativamente a la MAPK Fus3, tanto en condiciones de crecimiento vegetativo como tras la estimulación de la ruta de apareamiento. Asimismo, también controla a la MAPK Slt2, que opera en la ruta de integridad celular. Por último, dado que su sobre-expresión conduce a una disminución de los niveles fosfo-Kss1, se supone que también debe estar regulando a esta MAPK. Con el objetivo de valorar la función de Msg5 en la señalización mediada por estas MAPKs, se ha estudiado el nivel de estimulación de estas rutas a distintos niveles en mutantes msg5. Por una parte, el análisis mediante western blotting de la cantidad de fosfo-MAPKs, a la vez que confirma la función de Msg5 en la regulación de Fus3 y Slt2, descarta un papel significativo sobre Kss1 tanto en condiciones basales como en diversas situaciones bajo las cuales Kss1 se activa. El estudio transcriptómico de células que carecen de Msg5 indica su gran influencia sobre la transcripción de genes regulados por la ruta de apareamiento. Sorprendentemente, a pesar del elevado nivel de fosforilación de Slt2 en mutantes msg5, las diferencias de expresión de genes regulados por la ruta de integridad celular entre células silvestres y msg5 son relativamente limitadas. En dichos mutantes, el factor de transcripción Rlm1, regulado por Slt2, presenta un nivel de inducción transcripcional y de fosforilación (activación) similar al de células silvestres.
Junto a ello, hemos profundizado en los mecanismos que regulan la actividad de Msg5 sobre Fus3 y Slt2. Se mostrará cómo las dos formas producidas de Msg5 por comienzos de traducción alternativos (Flández et al 2004) presentan distintas especificidades frente a estas MAPKs, lo cual podría configurar un nuevo mecanismo de regulación de MAPKs por DSPs.
Flández, M., Cosano, I.C., Nombela, C., Martín, H., and Molina, M. (2004) Reciprocal regulation between Slt2 MAPK and isoforms of Msg5 dual-specificity protein phosphatase modulates the yeast cell integrity pathway. J Biol Chem 279: 11027-11034