Evaluación de la persistencia de las poblaciones de Bifidobacterium in situ en agua de río mediante técnicas moleculares y de cultivo.

Bonjoch X, Lucena F y Blanch AR.

Departament de Microbiologia, Facultat de Biologia. Av./ Diagonal 645 08028.Barcelona.    E-mail: xbonjoch@ub.edu

El género Bifidobacterium se ha propuesto como indicador del origen de la contaminación fecal, ya que algunas de sus especies se han asociado exclusivamente a origen fecal humano, y otras a animales de sangre caliente. La disponibilidad de una elevada concentración de bifidobacterias en las heces (10⁹-10¹⁰ UFC/g) facilita su detección en dicho tipo de contaminación. Además, su fisiología anaerobia, sus requisitos nutricionales complejos y la inhabilidad de multiplicarse por debajo de los 30ºC hacen poco probable su reproducción en el medio extraentérico. Existe todavía un desconocimiento sobre su persistencia en el medio ambiente. Por esta razón en este estudio se analizó la persistencia tanto de bifidobacterias ambientales como de cepas tipo de Bifidobacterium conjuntamente con otros indicadores de la contaminación fecal (coliformes fecales, enterococos y esporas sulfito-reductoras de clostridios). El análisis de las bifidobacterias se realizó con técnicas moleculares y técnicas de cultivo. La persistencia de las especies de B. adolescentis y B. dentium descritas como indicadoras del origen humano de la contaminación fecal, se valoró mediante iniciadores específicos del gen del 16S rRNA con la técnica de la PCR en tiempo real. Se valoró la persistencia de las bifidobacterias mediante medios selectivos. Estas dos técnicas mostraron unas enumeraciones significativamente diferentes, el recuento de bifidobacterias mediante la PCR en tiempo real fue mucho mayor que con el medio selectivo Beerens. También se detectó una diferencia significativa en los recuentos de las diferentes poblaciones bacterianas analizadas en las diferentes estaciones. En verano todas las poblaciones analizadas presentaron una persistencia más baja que en invierno, tanto con los análisis moleculares como con las técnicas de cultivo. El género Bifidobacterium en todos los casos fue la población que presentó una persistencia más baja, con unas T₉₀ de 15h a 20h en invierno y de 7h a 10h en verano mediante técnicas de cultivo. Las T₉₀ obtenidas mediante la PCR en tiempo real fueron de 100h (invierno) y 40h (verano). Concluyendo, el género Bifidobacterium resulta un buen indicador del origen de la contaminación fecal en aguas con aportaciones elevadas y recientes de dicha contaminación. Ahora bien, su baja persistencia en las aguas ambientales comporta una desventaja para su uso como marcador cuando la contaminación fecal no es reciente.