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1 Departamento de Microbiología y 2 Departamento de Farmacia Galénica, Facultad de Farmacia, Universidad de Santiago de Compostela, Campus Sur 15782, Santiago de Compostela, A Coruña. mpmpoza@usc.es
En los últimos años ha habido un aumento de infecciones fúngicas tales como la candidiasis debido a la creciente expansión de enfermedades relacionadas con la depresión del sistema inmune. Como consecuencia, han aparecido resistencias a los fármacos antifúngicos convencionales tales como el ketokonazol.
El enzima b 1-3 glucanasa actúan sobre los enlaces b 1-3 de glucano de paredes de levadura y hongos patógenos dificultando su desarrollo.
El hongo recombinante Trichoderma harzianum MRT17, procedente de la cepa silvestre CECT 2413, contiene en su batería cromosómica el gen de la b 1-3 glucanasa integrado y sobreexpresado bajo el control del promotor constitutivo pci1 de T. reesei, cuando se mantiene una presión selectiva con acetamida.
Por su parte, se dispone de una colección de cepas de Bacillus circulans que expresan b 1-3 glucanasas cuando se inducen con paredes celulares de levaduras.
El objetivo principal del presente trabajo consiste en combinar diferentes concentraciones de ketokonazol y de extractos enzimáticos procedentes de T. harzianum y B. circulans, para detener el crecimiento de Candida albicans, con el fin de obtener una dosis de ketokonazol efectiva menor, de tal forma que se disminuye el riesgo de aparición de resistencias.
Para ello, en primer lugar, se realizó un estudio de los enzimas secretados por dichos microorganismos y se encontró que el hongo T. harzianum MRT17 produce cantidad de enzima máxima a las 80 h de crecimiento, con una Km de 2 mg/ml, una Vmáx de 2500 nmol de glucosa/min mg de proteína y una temperatura óptima de actuación de 60ºC.
Por su parte, la cepa WL-13 de B. circulans demostró ser la mejor productora de este enzima.
La combinación de diferentes cantidades de ketokonazol, ciclodextrinas y de los extractos enzimáticos microbianos, en presencia de Candida albicans, reveló que es posible disminuir la dosis de ketokonazol aplicada de forma convencional, de tal forma que el riesgo de aparición de resistencias se ve reducido.