Expresión y sobreproducción de las lipasas LipA y LipC de Pseudomonas aeruginosa 42A2 en distintos huéspedes heterólogos.

Bofill, C. , Prim, N. , Pastor, F.I.J.  y Diaz, P.

Departamento de Microbiología, Facultad de Biología, Universidad de Barcelona. Av. Diagonal, 645. Barcelona 08028. e-mail: pdiaz@ub.edu

La cepa bacteriana Pseudomonas aeruginosa 42A2 (NCIB 40045) fue aislada a partir de una muestra de agua contaminada con residuos oleosos (1). Estudios previos han puesto de manifiesto la eficacia de dicha cepa para la transformación de aceites residuales en ácidos grasos hidroxilados, en cuya conversión se hallan implicados una lipooxigenasa y una hidroxilasa. Posteriormente, estos derivados hidroxilados son utilizados por las lipasas extracelulares que secreta la propia cepa, para la síntesis de estólidos (polímeros de ácidos grasos hidroxilados) (2). Las propiedades de estos compuestos les confieren numerosas aplicaciones en la industria como lubricantes, tensoactivos, plastificantes, aditivos alimentarios o cosméticos entre otras.

Con el objetivo de obtener la síntesis de estólidos in vitro, se realizó el clonaje y la sobreexpresión de las enzimas involucradas en esta reacción. Con la finalidad de aislar y clonar los genes codificantes para la actividad lipasa, se diseñaron un conjunto de cebadores para la amplificación de los genes lipA y lipC de la cepa Pseudomonas aeruginosa 42A2. Los fragmentos de ADN obtenidos fueron secuenciados y clonados en la cepa huésped E.coli DH5a. Los clones recombinantes no mostraron actividad lipasa, probablemente debido a la ausencia de la foldasa encargada del correcto plegamiento de las lipasas LipA y LipC (3). Paralelamente, para la sobreproducción y secreción de las respectivas lipasas, se clonaron los genes aislados en la cepa Bacillus subtilis BCL1050. Los clones recombinantes obtenidos volvieron a mostrar ausencia de actividad lipasa, indicando que las dos enzimas requieren la foldasa, independientemente del huésped utilizado. Actualmente está en proceso tanto la clonación del gen lipH de Pseudomonas aeruginosa que codifica para dicha foldasa, como la realización de diversas construcciones genéticas conteniendo a la vez los genes lipA/lipH, lipC/lipH, o lipA/lipC/lipH. Se prevé que en presencia de la foldasa LipH, los clones recombinantes obtenidos presenten actividad.

1.- Robert, M. (1989). Tesis doctoral. Universidad de Barcelona.

2.- Peláez, M., Orellana, C., Busquets, M., Marqués, A., Guerrero, A., Manresa, A. (2003). JACOS. 80: 859-866.

3.- Martínez, A., Ostrovosky, P., Nunn, D.N. (1999).Molecular Microbiology.34:317-326.