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Departamento de Microbiología y Parasitología, Facultad de Farmacia, Universidad deSevilla. rengel@us.es
Las bacterias halófilas moderadas son microorganismos capaces de crecer óptimamente en medios que contienen entre un 3 y un 15% de NaCl y están representadas por un gran número de especies pertenecientes a diferentes géneros (Ventosa y col., 1998). Al igual que otros microorganismos extremófilos, las bacterias halófilas constituyen una importante fuente de enzimas de interés biotecnológico. En un muestreo realizado en diferentes salinas del sur de España, se aislaron bacterias halófilas capaces de producir diferentes hidrolasas extracelulares, centrándonos en el estudio de la actividad lipolítica. Entre todas las cepas aisladas que presentaban ésta actividad se seleccionó la cepa SM19 para un estudio en profundidad. Tras su caracterización fenotípica y genotípica, ésta fue descrita como una nueva especie perteneciente al género Marinobacter, a la que se denominó Marinobacter lipolyticus (Martín y col., 2003).
La construcción de un banco de genes en E. coli mediante la técnica de encapsidación “in vitro” nos ha permitido aislar y secuenciar el gen lipM, de 816 pares de bases, que codifica la lipasa LipM producida por M. lipolyticus. Una vez localizado y aislado dicho gen, se procedió a su estudio mediante diversos programas informáticos. La comparación de la secuencia de LipM con las de otras lipasas existentes en las bases de datos reveló homología con el grupo de las a-b hidrolasas, presentando el pentapéptido conservado en esta familia (Gly-X-Ser-X-Gly).
Por otra parte, se están llevando a cabo experimentos de expresión heteróloga en E. coli utilizando como vector de expresión pET22b(+). Para la clonación del gen lipM en dicho vector se diseñaron unos cebadores específicos que amplificasen la región del gen y que introducían las secuencias de las enzimas de restricción EcoRI (extremo N-terminal) y XhoI (extremo C-terminal). De esta forma obtuvimos los clones pETlipEX y pETlipNX que están siendo analizados con el fin de detectar la expresión de la proteína recombinante.
S. Martín, M.C. Márquez, C. Sánchez-Porro, E. Mellado, D.R. Arahal and A. Ventosa. Marinobacter lipolyticus sp. nov., a novel moderate halophile with lipolytic activity. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 53: 1383-1387
Ventosa, A., Nieto, J.J. and Oren, A. 1998. Biology of moderately halophilic aerobic bacteria. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 62: 504-544