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Instituto Microbiología-Bioquímica. Departamento de Microbiología-Genética. Consejo Superior de Investigaciones Científicas/Universidad de Salamanca. 37007 Salamanca. España. * sarpadilla@usal.es
La familia de GTPasas Rho y sus proteínas efectoras son reguladores importantes involucrados en muchas funciones de las células eucariotas y relacionadas con la organización de la actina y el establecimiento de la polaridad. En Schizosaccharomyces pombe Rho1p es esencial, activa directamente la enzima (1,3) B-D-glucán sintasa y participa en la regulación de la biosíntesis de la pared celular y la morfogénesis.
En este trabajo describimos la caracterización de la GTPasa Rho5p, muy similar a Rho1p, con la que comparte 86% identidad y 95% similitud. El gen rho5+ se expresa preferentemente durante la fase estacionaria y en el proceso de conjugación. rho5+ es inducido en condiciones de falta de nutrientes. Las células carentes de rho5+ son viables y no muestran defectos de crecimiento o de conjugación. En las células de fase estacionaria GFP-Rho5p se localiza en la membrana y en el citoplasma. Cuando GFP-Rho5p se sobreproduce en células en crecimiento, se localiza en el septo pero no causa ningún efecto en las células.
La sobreexpresión del alelo hiperactivo rho5G15V causa un efecto morfológico similar al de rho1G15V pero la penetración del fenotipo es significativamente menor. La sobreexpresión del alelo dominante negativo rho5T20N causa lisis similar a la de rho1T20N. La sobreexpresión de rho5+ puede rescatar la letalidad de células carentes de Rho1p. Sin embargo, Rho5p no es tan eficaz como Rho1p en el mantenimiento de la integridad de la pared celular o la organización de la actina. Adicionalmente, cuando se reprime rho1+ durante la fase estacionaria, las células carentes de rho5+ presentan mayores defectos de viabilidad. Estos resultados sugieren que Rho5p actúa durante la fase estacionaria de forma similar a Rho1p, reforzando las funciones de esta GTPasa.