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Departamento de Biología Molecular. Centro de Biología Molecular Severo Ochoa (UAM-CSIC). Universidad Autónoma de Madrid. *Instituto de Catálisis y petroleoquímica (CSIC). Campus UAM. dlinde@cbm.uam.es.
Las a-glucosidasas (EC 3.2.1.20) son glicosil hidrolasas que actúan sobre los extremos no reductores de un variado número de glúcidos produciendo la liberación sucesiva de unidades de D-glucosa.
En este trabajo se describe una nueva a-glucosidasa de la levadura Xanthophyllomyces dendrorhous (Phaffia rhodozyma) que además de presentar actividad hidrolasa, tiene la capacidad de sintetizar oligosacáridos mediante una actividad transglicosidasa.
La purificación de esta proteína se ha realizado partiendo de cultivos de la levadura crecidos enmedios basados en maltosa. En el proceso se empleó filtración tangencial seguida de cromatografías de intercambio iónico a distintos pHs.
La a-glucosidasa purificada presenta un alto espectro de actuación, muestra actividad hidrolasa sobre distintos oligosacáridos, maltodextrinas, glucógeno y almidón soluble. No tiene actividad sobre sacarosa. El análisis cinético de esta enzima determinó unos valores de Vmax de 46, 24, 30 y 8.6 mg glucosa liberados min-1, y de Km de 2.71, 0.55, 0.86 y 0.72 mM para maltosa, maltotriosa, maltoheptosa y almidón, respectivamente.
La enzima purificada presenta una actividad transglicosidasa de alto espectro. Utilizando maltosa como sustrato forma distintos tipos de productos; todos ellos oligosacáridos que incluyen enlaces glicosídicos a-(1,4) y/o a-(1,6). Isomaltosa, maltotriosa, panosa y maltotetraosa son algunas de las moléculas sintetizadas. Se estudió el efecto de la concentración de maltosa en el medio sobre la tasa transglicosidasa/hidrolasa. La mezcla de azúcares generados presenta una composición cualitativa muy similar a la de los preparados comerciales de isomaltooligosacáridos que se utilizan como completo dietético con actividad prebiótica. Estos preparados se obtienen industrialmente mediante la hidrólisis enzimática del almidón y posterior tratamiento con transglicosidasas fúngicas.
La enzima estudiada no muestra actividad glicosiltransferasa cuando se utiliza sacarosa como sustrato.