MLVA (Multilocus Variable-Number Tandem-Repeat Analysis) como método alternativo para la tipificación de cepas de E. coli serotipo O157:H7 productoras de tóxina de Shiga.

Herrera, L.*, Franco, L.*, Aladueña, A.*, Herrera, S.*, Blanco, M.⁺, Blanco, J.E.⁺, Mora, A. ⁺, Dhabi, G.⁺, Blanco, J.⁺, y Echeita, M.A.*

*Laboratorio Nacional de Referencia de Salmonella y Shigella, Centro Nacional de Microbiologia, Instituto de Salud Carlos III, 28220 Majadahonda, Madrid, España. ⁺Laboratorio de Referencia de E. coli (LREC). Departamento de Microbiología y Parasitología. Facultad de Veterinaria. Universidad de Santiago de Compostela, Campus de Lugo, 27002. aecheita@isciii.es.

El grupo Escherichia coli productor de toxina de Shiga (STEC) es el patógeno emergente más importante causante de diarrea alimentaria. El serotipo más frecuentemente implicado en esta patogénesis en todo el Mundo es el O157:H7. En los últimos años su impacto en Salud Pública ha forzado la necesidad de mejorar las técnicas preventivas y potenciar el estudio de los brotes. Las investigaciones epidemiológicas tradicionales utilizan la electroferesis en campo pulsado (PFGE) como método de referencia pero diversos factores han motivado la búsqueda de nuevos métodos moleculares basados en la secuenciación como el análisis de las repeticiones de pequeñas secuencias de ADN que se encuentran repetidas en tandem (TR). El análisis de diferentes loci (MLVA, múltiple-locus VNTR análisis) ha sido utilizado con éxito por Noller y col. para discriminar entre cepas. El objetivo de este estudio fue evaluar este método como alternativa para la tipificación de STEC O157:H7 usando 50 cepas de origen humano, animal y alimentario aisladas en España. Se realizó una modificación del protocolo descrito con el fin de amplificar todos los loci de manera simultánea. Todos los aislados fueron amplificados con las siete parejas de primer correspondientes a cada locus (TR1 a TR7) con 7 excepciones: un aislado no amplificó los locus TR! y TR2 y 5 aislados no amplificaron el locus TR5. Todos los aislados agrupados en un cluster específico mediante PFGE presentaron un único patrón de repeticiones mediante MLVA excepto en un cluster donde uno de los aislados presentó 6 repeticiones en lugar de 12 en el locus TR1, 26 repeticiones en lugar de 27 en el locus TR2 y, 17 repeticiones en lugar de 16 repeticiones en el locus TR5. El resto de aislados que no fueron agrupados en cluster y que fueron clasificados como casos esporádicos, presentaron un único patrón mediante MLVA. Estos aislados difieren entre ellos en al menos 2 loci. El locus que presenta una menor variabilidad fue el TR6. El número de repeticiones para cada locus varía de las publicadas por Noller y col. pero nuestros datos sugieren que el MLVA debería ser considerado como una alternativa para la tipificación de cepas STEC O157:H7.