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1: Grupo de genética de Micobacterias. Dpto. Microbiología. Facultad de Medicina. Universidad de Zaragoza. España. 2: Dipartimento di Genetica e Microbiologia, Università degli Studi di Pavia, Italia. santirg@unizar.es
Introducción.
Dada la alta resistencia intrínseca a antibióticos de las micobacterias, el número de fármacos eficaces contra la tuberculosis es muy limitado. La aparición de cepas de Mycobacterium tuberculosis resistentes a antituberculosos dificulta el control de la enfermedad. La mayoría de las cepas resistentes tienen mutaciones en los genes que codifican las dianas de acción de los fármacos o las enzimas que activan profármacos. Sin embargo, en algunas cepas resistentes no se ha encontrado ninguna mutación. Una posible explicación es que la resistencia sea debida a la acción de bombas de eflujo que pueden conferir resistencia a antibióticos química y estructuralmente no relacionados, con la consiguiente aparición de multirresistencia.
Objetivo.
M. tuberculosis tiene más de 20 posibles ORFs que codifican para bombas de eflujo de la familia MFS (Major Facilitator Superfamily). El objetivo de este trabajo es el estudio y la caracterización de las bombas de eflujo codificadas por los genes Rv0783c, Rv1250, Rv1258c, Rv1410c y Rv2333c para evaluar su contribución en la resistencia a fármacos de M. tuberculosis usando como modelo M. bovis BCG.
Resultados y discusión.
Se han utilizado dos aproximaciones. Primero; sobre expresión. Segundo; construcción de cepas con el gen de la bomba inactivado. Con estas cepas se han probado una gran variedad de compuestos entre los que se encuentran antibióticos, diversos colorantes, etc. Se ha encontrado que estas bombas confieren bajos niveles de resistencia a antituberculosos de primera línea como rifampicina (Rv1410c) y etionamida (Rv1250), de segunda línea como PAS (Rv1258c) o a antibióticos usados en el tratamiento de la lepra como la clofacimina (Rv1410c) así como, a colorantes como la acriflavina (Rv1250, Rv1258c). En contra de lo esperado, la inactivación del gen Rv0783c reduce la sensibilidad a vancomicina. Además, se han realizado experimentos de acumulación con acriflavina (Rv1258c) y tetraciclina marcada con tritio (Rv1258c, Rv2333c) confirmando que estas bombas expulsan el antibiótico fuera de la célula. Estos resultados, combinados con la información derivada del uso de la genómica, pueden ayudar al conocimiento de los mecanismos de resistencia intrínseca en M. tuberculosis y así, contribuir al desarrollo de nuevos agentes que puedan bloquear las bombas de eflujo, lo que resultaría en un aumento de la sensibilidad del bacilo a los antituberculosos convencionales, haciéndolos más efectivos y, de este modo, siendo más fácil controlar este importante patógeno humano.