Clonaje y sobreexpresión de enzimas termorresistentes

Ferreras, E.R. y Berenguer, J.

Centro de Biología Molecular Severo Ochoa UAM-CSIC. Crta. Colmenar viejo, Km 15, 28049, Madrid. e-mail: erferreras@cbm.uam.es

Las enzimas han representado y representan un importante papel en todo tipo de procesos industriales, siendo fundamentales catalizadores de múltiples reacciones. Hoy en día disponemos de un gran número de enzimas utilizadas en multitud de procesos, y su número y aplicaciones no para de crecer. Utilizadas en la industria alimentaria, química, papelera, fabricación de biosensores y un largo etcétera. La mayor parte de las enzimas utilizadas proceden de organismos mesófilos, aunque se comienzan a usar con éxito las de organismos termófilos.

Los componentes celulares de los organismos termófilos (proteínas y ácidos nucleicos) son también termoestables. Las enzimas de estos organismos (termozimas) están adaptadas para realizar su función a elevadas temperaturas, pero además, presentan un alto nivel de resistencia frente a diversos agentes desnaturalizantes, como detergentes y solventes orgánicos o condiciones extremas de acidez o alcalinidad. Estas características les confieren gran interés tanto en aplicaciones donde sea necesaria la presencia de solventes orgánicos, como en aquellas en las que se deba trabajar a altas temperaturas.

(1)La publicación del genoma completo de T. thermophilus HB27 (Mayo 2004), ha posibilitado rastrear su DNA en busca de secuencias homólogas a enzimas conocidas y con potencial interés en aplicaciones biotecnológicas o industriales, como esterasas o aquellas implicadas en la hidrólisis o modificación de oligo y/o polisacáridos. El objetivo que perseguimos es conseguir la sobreproducción de éstas en E. coli desde vectores pET, y si no fuera posible obtener las enzimas funcionales en E. coli, lo haríamos en T. thermophilus, usando vectores propios del tipo pMKE.

En esta comunicación se discutirá el clonaje y expresión de genes homólogos a b-glucosidasa, a-glucosidasa, a-galactosidasa y amilopululanasa de T. thermophilus HB27.

(1) Henne, A y cols. Nat Biotechnol. 2004 May; 22(5):547-53