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Dpto. Inmunología, Microbiología y Parasitología. Facultad de Farmacia. Universidad del País Vasco-Euskal Herriko Unibertsitatea. Paseo de la Universidad nº 7, 01006 Vitoria-Gasteiz. E-mail: cgirbau001@ikasle.ehu.es
Campylobacter jejuni bajo condiciones adversas, como las bajas temperaturas o la ausencia de nutrientes, es capaz de entrar en el estado viable no cultivable (VNC). Bajo este estado pierde su capacidad de crecer en medios de cultivo pero mantiene actividad metabólica detectable.
C. jejuni posee dos sistemas de glicosilación: glicosilación de la flagelina (O-linked) y sistema general de glicosilación (N-linked). El locus que codifica los enzimas implicados en este último tipo de glicosilación se denomina pgl (protein glycosylation) y está altamente conservado en C. jejuni. La proteína codificada por el gen pglB es un enzima clave que probablemente actúe como una oligosacariltransferasa responsable de la transferencia del azúcar a la cadena peptídica. Se ha demostrado que las mutaciones en este locus afectan directamente a la glicosilación y a ciertas propiedades virulentas de C. jejuni.
El objetivo de este trabajo es el estudio de la posible relación entre el sistema general de glicosilación y la supervivencia de C. jejuni; así como la búsqueda de glicoproteínas como potenciales marcadores de viabilidad.
Se construyó una cepa de C. jejuni con el gen pglB mutado por inserción de un cassette de resistencia a kanamicina y se indujo el estado VNC, tanto de la cepa mutante como de su homóloga salvaje. Se evaluó comparativamente el efecto de las condiciones que provocan la entrada en el estado VNC en función de determinados parámetros celulares (TBC, UFC, ARC).
Se analizó a lo largo de la supervivencia el perfil de proteínas totales y el perfil de glicoproteínas, en este último caso mediante blotting frente a SBA.
Los resultados muestran que a lo largo de toda la supervivencia el número de células totales y de células respiradoras se mantiene en torno a los valores iniciales tanto en la cepa mutante como en la salvaje. Por contrario, la cultivabilidad descendió progresivamente hasta alcanzar valores indetectables, en el caso de la cepa mutante con significativa mayor rapidez que su homóloga salvaje. Por ello, cabe pensar en una posible implicación de la glicosilación mediada por el locus pgl en el proceso de supervivencia.
En los perfiles proteicos totales no se evidencian diferencias significativas entre la cepa mutante y la salvaje. Por contrario, los resultados del blotting muestran una evidente disminución de la reactividad frente a SBA en la cepa mutante, confirmando que la mutación en el locus génico pgl afecta de modo importante a la glicosilación.
Este trabajo forma parte del proyecto AGL2002-04480-C03-02 subvencionado por el Ministerio de Ciencia y Tecnología (MCyT).