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Microbiología, Dto. Biología, Universitat de les Illes Balears (UIB). Ctra. Valldemossa Km. 7,5 – 07122 Palma de Mallorca. e-mail: joseph_christie@yahoo.es
La mayoría de las secuencias de inserción (IS) asociadas con genes catabólicos en Pseudomonas pertenecen a las familias IS5 e ISL3. P. stutzeri, conocida tanto por su gran versatilidad catabólica y adaptativa como por su elevada plasticidad genómica, presenta cepas que contienen en su genoma IS representantes de ambas familias. En estudios previos realizados con P. stutzeri AN10, se han detectado tres secuencias de inserción de tipo IS5 muy ligadas a la ruta de degradación del naftaleno: una de ellas situada cadena arriba de la vía alta de degradación del naftaleno, y dos flanqueando nahW (gen que codifica para una salicilato hidroxilasa) formando un posible transposón compuesto. P. stutzeri AN10 también contiene dos copias de una secuencia de inserción tipo ISL3, una de las cuales se halla situada justo cadena abajo del mencionado posible transposón compuesto nahW, y que nombramos ISPst3.
ISPst3 presenta dos repeticiones terminales invertidas (IR) de 24 pb y dos fases de lectura abierta: orf1 y tnpA. El gen orf1, de función desconocida, es semejante en secuencia a transportadores de membrana de la familia LysE. El gen tnpA codifica para una presumible transposasa funcional. El objetivo de este trabajo fue esclarecer el papel que pudieran tener orf1 y tnpA en el proceso de transposición.
Para ello se insertó ISPst3, con delecciones en las diferentes fases de lectura abiertas, en el plásmido suicida pGP704, resultando las construcciones: pJOC9 (ISPst3 orf1+/tnpA+ como salvaje), pJOC10 (ISPst3 orf1-/tnpA+) y pJOC11 (ISPst3 orf1+/tnpA- como control negativo). Adicionalmente, y para facilitar el seguimiento del salto de la IS, se insertó un casete de kanamicina.
Los experimentos llevados a cabo han demostrado una reducción de casi un 45% en las frecuencias de transposición de la secuencia de inserción orf1- frente a la de la orf1+. Adicionalmente, se ha observado que ISPst3, ante determinadas condiciones de estrés, incrementa extraordinariamente su frecuencia de salto, comportamiento que no se observa entre las secuencias de inserción de tipo IS5. Se están realizando ya experimentos para determinar el papel que tiene orf1 en este comportamiento y la utilidad adaptativa de tal incremento de la actividad de transposición para la célula huésped.