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Ruiz, C. 1,2, Falcocchio, S. 1,2, Saso, L.2 y Díaz, P.1
1Departmento de Microbiología, Facultad de Biología, Universidad de Barcelona, Av. Diagonal 645, 08028 Barcelona, España. 2Dipartimento di Fisiologia Umana "Vittorio Erspamer", Università di Roma “La Sapienza”, P.le Aldo Moro 5, 00185 Roma, Italia. *e-mail: cruiz@bio.ub.es
La actividad lipasa de Helicobacter pylori parece ser un factor de virulencia importante debido a que su efecto sobre los lípidos de la mucosa gastrointestinal del huésped podría dañar la capa protectora del estómago y la membrana apical de las células subyacentes, así como generar lípidos proinflamatorios y citotóxicos (Tsang y Lam, 1999). Por ello, el presente trabajo se centró en la búsqueda y caracterización de las proteínas responsables de dicha actividad, desconocidas hasta el momento.
La comparación del proteoma de H. pylori 26695 con la secuencia aminoacídica de lipasas previamente descritas reveló que la proteína deducida HP0739, asignada como una hipotética 2-hidroxi-6-oxohepta dienoato hidrolasa (Tomb et al., 1997), mostraba una elevada homología con las lipasas bacterianas de la familia V (Arpigny y Jaeger, 1999). El análisis informático de su secuencia aminoacídica reveló que HP0739 es una proteína de 241 residuos sin péptido señal, que tiene un peso molecular de 27,5 kDa y un pI igual a 9. Esta proteína presenta una estructura globular con un solo dominio, y tiene las características típicas de las lipasas: (1) plegamiento a/b formado por 8 láminas b y 7 hélices a, y (2) tríada catalítica formada por los residuos serina99 (contenida en el pentapéptido GHSPG), ácido aspártico192 e histidina219, cuya localización se corresponde con la que presentan en el plegamiento de las lipasas de la familia V. Por tanto, se procedió a la clonación del gen HP0739 (que fue denominado estV), así como a la purificación y posterior caracterización de la lipasa HP0739 (EstV).
La caracterización de EstV reveló que esta enzima presenta el comportamiento típico de las carboxilesterasas, como está descrito para la mayoría de lipasas de la familia V (Arpigny y Jaeger, 1999), mostrando una preferencia muy marcada por sustratos de cadena corta y produciendo cinéticas del tipo Michaelis-Menten, sin activación interfacial. La actividad máxima de EstV se obtuvo sobre p-nitrofenil acetato, MUF-butirato y tributirina, mientras que la enzima mostró una actividad muy baja sobre sustratos con longitud de cadena igual o superior a 8 átomos de carbono. Las condiciones óptimas de actuación de EstV fueron 55 ºC y pH 10, aunque la enzima también mostró una elevada actividad a temperaturas desde los 45 ºC hasta los 60 ºC, y a pH 6 y 9–9,5, así como una actividad moderada a 37 ºC y pH 7.
El conocimiento sobre las características bioquímicas de esta lipasa, así como sobre su inhibición, podrían contribuir en la terapia de la úlcera y otras enfermedades producidas por H. pylori.