M - 287
Centro de Biología Molecular “Severo Ochoa”. CSIC y Universidad Autónoma de Madrid. 28049-Cantoblanco, Madrid. miguel.remacha@uam.es
Las proteínas P1a, P1b, P2a y P2b de Saccharomyces cerevisiae son un grupo de proteínas con PM de 11 kDa y pI comprendidos entre 3,61 y 3,89 que, junto con P0, constituyen el tallo de la subunidad mayor del ribosoma. Mientras que P0 es una proteína estructural del ribosoma, esencial para la viabilidad celular, las proteínas P1 y P2 se intercambian entre el ribosoma y el citoplasma, existiendo un “pool” en el mismo.
Se están realizando estudios in vivo e in vitro sobre el papel que ejercen las proteínas ácidas en la regulación de la traducción en la levadura S. cerevisiae, empleando la cepa W303 (wt) y el mutante D4567 en el que están ausentes las cuatro proteínas P1/P2. Extractos de la cepa mutante muestran una tasa de síntesis proteica inferior, al tiempo que producen un patrón de expresión proteica diferente en geles bidimensionales. In vivo, la ausencia de las proteínas P en el ribosoma produce una disminución de la velocidad de crecimiento. Asimismo, se observan diferencias en respuesta a condiciones de stress, probable reflejo del diferente patrón de expresión observado.
A partir de los geles bidimensionales de proteínas sintetizadas por extractos de ambas cepas se han secuenciado spots que se expresan diferencialmente, con objeto de identificar estas proteínas. En general, la mayoría de las proteínas se traducen mejor por ribosomas silvestres o se traducen por igual en ambas cepas. Además, hay cambios puntuales de proteínas que sólo están presentes en el sistema silvestre (como Fkbp12) y otras (eIF5A) que son traducidas mejor por ribosomas sin proteínas P.
Como estrategia alternativa, hemos realizado un estudio sistemático, mediante el uso de microarrays, utilizando como sondas mRNA total y mRNA asociado a polisomas, de los genes que se transcriben y/o traducen diferencialmente en ambos sistemas.