Análisis de las secuencias necesarias para la unión a DNA y el control de la transcripción por el regulador AtzR de Pseudomonas sp. ADP

Porrúa, O.*, Santero, E. y Govantes, F.

Centro Andaluz de Biología del Desarrollo y Departamento de Ciencias Ambientales. Universidad Pablo de Olavide. Carretera de Utrera, Km 1, 41013, Sevilla. *E-mail: oporfue@upo.es

El regulador tipo LysR (LTTR), AtzR, controla la expresión del operón atzDEF de Pseudomonas sp. ADP, responsable de la mineralización del ácido cianúrico. Conjuntamente con el regulador global NtrC, AtzR activa la transcripción de atzDEF en condiciones de limitación de nitrógeno. Además, de un modo independiente de NtrC, incrementa los niveles de expresión del operón en respuesta a la presencia de ácido cianúrico y regula negativamente la expresión de su propio gen, atzR, que se transcribe divergentemente (García-González et al, 2005). Los reguladores del tipo LysR generalmente actúan a través de la unión a una secuencia palindrómica con la estructura T-N₁₁-A (Schell, 1993). En la región intergénica atzR-atzDEF existe una secuencia con homología al consenso para los sitios reconocimiento de los LTTR (Martínez et al, 2001). Los objetivos de este trabajo son la identificación de las las secuencias en cis necesarias para la regulación por AtzR y el análisis de la capacidad de unión del regulador a dichas secuencias. Se han realizado ensayos de expresión de variantes de los promotores de atzR y atzDEF con deleciones y mutaciones puntuales en la región intergénica.

Los resultados muestran que el posible sitio de unión de LTTR es esencial para la regulación de ambos genes e indican la existencia de secuencias adicionales que son esenciales tanto para la activación de la expresión de atzDEF como para la autorrepresión de atzR. Finalmente, se ha purificado AtzR y se han realizado ensayos "in vitro" de unión a las secuencias previamente identificadas, demostrando que el regulador se une en la zona de estudio. En conjunto, los resultados sugieren que AtzR reconoce al menos dos sitios en la región intergénica atzR-atzDEF. Se conocen otros reguladores del tipo LysR que requieren tanto un sitio de reconocimiento (RBS) como un sitio de activación (ABS) para la unión a DNA y el control de la transcripción (Schell, 1993). Por tanto, los datos indican que AtzR podría compartir los mecanismos de acción de otros reguladores de la misma familia.

García-González et al., 2005. J. Bacteriol. 187:155-167.

Martínez et al., 2001. J. Bacteriol. 183:5684-5697.

Schell, 1993. Annu. Rev. Microbiol. 47 :597-626.