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Departamento de Sanidad Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad Complutense de Madrid, Avda Puerta de Hierro s/n, 28040-Madrid, alvsanmillan@hotmail.com
Haemophilus parasuis es un microorganismo comensal del tracto respiratorio superior de los cerdos, que bajo determinadas circunstancias puede ser invasivo y causar patologías sistémicas severas, caracterizadas por poliserositis fibrinosa, artritis y meningitis, denominada enfermedad de Glasser. Este bacilo Gram-negativo se aísla de forma rutinaria en el laboratorio VISAVET, en la Facultad de Veterinaria de la UCM. La identificación se basa en características fenotípicas en agar chocolate y un test de CAMP.
En los antibiogramas rutinarios que nuestro laboratorio realiza de H. parasuis aparecen de forma creciente cepas resistentes a beta lactámicos, que son los antibióticos de elección en procesos respiratorios en ganado porcino. Hasta el momento no se ha caracterizado ningún mecanismo de resistencia a beta lactámicos en esta especie bacteriana.
Primeramente y para confirmar la identificación de la especie H. parasuis, hemos aplicado a estas cepas una técnica de PCR específica basada en la amplificación del gen codificante para la subunidad 16S del RNA, resultando un producto de 821 pb. Como resultado hemos ratificado la identificación de 67 aislados de H. parasuis, de los que 10 presentan resistencia a ampicilina. Posteriormente hemos aplicado el test de la nitrocefina a estas cepas, siendo todas las cepas resistentes (≤18 mm Amoxicilina) positivas, mientras que las cepas sensibles fueron negativas, lo que demuestra que enzimas del tipo beta lactamasas son las responsables de la aparición de la resistencia en la especie H. parasuis. Dado que estas enzimas suelen estar codificadas por genes plasmídicos en otros patógenos respiratorios del ganado porcino, hemos procedido a la extracción de plásmidos de estas cepas resistentes, comprobando que todas ellas contienen un plásmido de patrón indistinguible en geles de agarosa. Actualmente estamos caracterizando estos plásmidos y comprobando la existencia de genes codificantes de beta lactamasas (bla ROB-1, bla TEM-1...) que aparecen en otros patógenos respiratorios de cerdos, sin descartar la posibilidad de encontrar nuevos genes no descritos. Por otro lado también hemos transformado cepas de Escherichia coli con estos plásmidos para determinar la presencia del gen de resistencia en este replicón y proceder a su caracterización genética.
De este modo esperamos caracterizar el mecanismo de resistencia a beta lactámicos en H. parasuis, así como los genes implicados en el mismo y su posible transmisión a otros patógenos respiratorios porcinos o humanos.
Agradecemos al Grupo de Diagnóstico del Laboratorio VISAVET por la identificación de los aislados clínicos. Este proyecto ha sido parcialmente financiado con el proyecto AGL2002/02637.