Una porina de 40kDa de Aeromonas salmonicida capaz de unir C1q: clonaje, secuenciación, susceptibilidad al suero e inmunoprotección en peces.

Ramírez, S.; Vilches, S.; Canals, R.; Tomás J. y Merino S.

Departamento de Microbiología. Facultad de Biología. Universidad de Barcelona. Avda. Diagonal 645, 08028 Barcelona. e-mail: sramirez_peinado@hotmail.com

Las cepas típicas de Aeromonas salmonicida son el principal agente causal de furunculosis en piscifactorías, mientras que las cepas atípicas se han hallado asociadas a diferentes tipos de infecciones tanto en peces dulceacuícolas como marinos. A pesar de que el mecanismo de patogenicidad no esta claro, diferentes estructuras como la lámina-A, la cápsula y el lipopolisacárido (LPS) se han relacionado con la protección de la bacteria ante la acción bactericida del complemento. En los estudios desarrollados hasta el momento poca atención se ha prestado al papel de las proteínas de membrana externa (OMPs) y su relación con la virulencia  de este microorganismo. En el presente estudio, analizamos la contribución de la principal proteína de membrana externa de A. salmonicida a la resistencia frente al suero no inmune.

Mediante ensayos de unión directa de C1q biotinilado (factor inicial de la vía clásica del complemento) a proteínas de membrana externa purificadas de la cepa de A. salmonicida A450 (A⁺:O⁺), identificamos una proteína de 40kDa capaz de unir directamente C1q. El gen estructural de la misma fue clonado en Escherichia coli y secuenciado. La secuencia aminoacídica de la porina de 40 kDa de A. salmonicida, su habilidad de unión a C1q mediante un proceso independiente de anticuerpos, y su immunoreactividad cruzada con la porina de tipo II de A. hydrophila AH-3, nos mostraban su importancia en la susceptibilidad al suero de A. salmonicida A450. Con objeto de definir su papel como molécula de superficie implicada en la resistencia al suero, así como en la unión de C1q, obtuvimos mutantes definidos por inserción en cepas tanto sensibles como resistentes al suero. OMPs de dichos mutantes no reaccionaban con anticuerpos específicos para la porina detipo II de A. hydrophila y eran incapaces de unir C1q. La introducción de un plásmido que contenía el gen estructural para la porina de 40 kDa de A. salmonicida o bien el correspondiente al de la porina de tipo II de A. hydrophila AH-3 daba lugar a la complementación de los mismos. Adicionalmente, se estudio la distribución del gen y/o proteína de 40 kDa de A. salmonicida en cepas tanto típicas como atipicas comprobándose su presencia en todas ellas. Finalmente, se determinó la importancia de la porina de tipo II de A. hydrophila AH-3 como immunoprotector en peces ante infecciones producidas por A. salmonicida o A. hydrophila, observándose una reducción de la mortalidad en los individuos vacunados de 70-80%, respectivamente.