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1Dpto. Biología Celular, Bioquímica y Biología Molecular. Facultad de Farmacia, Universidad San Pablo-CEU. Urbanización Monte Príncipe, Boadilla del Monte. 28668 Madrid. 2Servicio de Microbiología, Hospital Ramón y Cajal, 28034 Madrid. marpoz@ceu.es
La colonización intestinal que ocurre tras el nacimiento sufre modificaciones especialmente intensas a lo largo de los primeros meses de vida. El objetivo de este trabajo fue estudiar la dinámica poblacional de Enterococcus presentes en las heces de niños a lo largo de sus tres primeros años de vida.
Para ello se recogieron quincenalmente muestras fecales de 6 niños sanos nacidos a término durante sus primeras 34 semanas de vida, registrando el tipo de dieta de ese momento. A los tres años, se volvió a recoger otra muestra fecal. Las heces se sembraron en Slanetz-Bartley agar, seleccionando 6 colonias compatibles con Enterococcus por cada muestra. La identificación de especie se realizó mediante PCR con cebadores específicos para los genes efaA de E. faecalis y aac-Ii de E. faecium. Se estudió la relación clonal de los aislados mediante electroforesis en campo pulsante (PFGE-SmaI) así como la sensibilidad a macrólidos, glicopéptidos, aminoglicósidos, tetraciclina, ciprofloxacino, cloranfenicol y trimetropim mediante la técnica de difusión en agar. Se ha puesto a punto un sistema de detección por PCR multiplex de los genes que codifican los factores de virulencia ace, esp, gelE, cylA y agg. La caracterización fenotípica de la producción de bacteriocinas, hemolisinas y proteasas se realizó también en todos los clones diferentes.
En cada niño se detectó la colonización persistente de uno o dos clones en todas sus muestras fecales, coexistiendo en algunas ocasiones con clones esporádicos. La presencia de los clones esporádicos estuvo relacionada con la introducción de nuevos alimentos en la dieta. No se observó ninguna relación clonal entre los diferentes aislados de cada niño. Se detectaron elevados niveles de resistencia antibiótica, especialmente en el caso de tetraciclina (66%), SXT (53%), eritromicina y cloranfenicol (46%) junto con resistencia de alto nivel a gentamicina (26 %). La producción de proteasas y bacteriocinas se constató en el 9 y el 36% de los clones analizados, respectivamente. La presencia del gen ace fue detectada en el 45 % de los clones, mientras que los genes agg, esp, y gelE fueron positivos en el 27% de los clones, existiendo diferentes combinaciones. No se detectó actividad hemolisina ni presencia del gen cylA en ninguno de los aislamientos. El seguimiento de los clones a lo largo del estudio permitió detectar variaciones en la sensibilidad antibiótica, así como la estabilidad de los factores de virulencia a lo largo del tiempo.
En conclusión, la población de los enterococos fecales que colonizan el intestino de los niños analizados, se mantiene relativamente estable a lo largo del periodo analizado, si bien se detectan variaciones en cuanto a la sensibilidad antibiótica de los clones.