V - 275
1Instituto de Agrobiotecnología, CSIC-UPNA Mutilva Baja, Navarra; 2Villava, Navarra; 3 Facultad de Veterinaria, Universidad de Zaragoza, Zaragoza; 4Instituto Vasco de Investigación y Desarrollo Agrario (NEIKER). Sanidad Animal, Derio, Vizcaya; ramses.reina@unavarra.es
El virus maedi visna (VMV) causa una enfermedad lenta multisistémica en pequeños rumiantes y presenta una alta prevalencia en distintos países, incluyendo España. La vía horizontal de contagio es importante, aunque específicamente la transmisión del virus vía semen no se ha estudiado en ovinos. Actualmente se emplean ELISAs de nueva generación para la detección de individuos seropositivos, pero las oscilaciones en el título de anticuerpos en sangre y el periodo requerido para su aparición, hacen necesario desarrollar métodos de detección del propio virus (PCRs). Para estudiar el valor diagnóstico de un método ELISA y diferentes PCRs desarrolladas para distintas regiones del provirus, hemos utilizado 142 ovinos, distribuidos en 4 grupos (A-D), procedentes de explotaciones con baja seroprevalencia (0-10,5%) y mantenidos aislados en instalaciones independientes. Mediante análisis periódicos por ELISA y PCR, se demostró que las PCRs detectaban animales infectados entre los seronegativos. Algunas de estas infecciones se confirmaron en etapas subsiguientes mediante ELISA. Del grupo de hembras A, se eliminaron las infectadas y el resto, libre de VMV, se utilizó en un experimento de inseminación artificial (I.A.) para determinar si el semen transmitía el virus. En otros lentivirus se ha demostrado que el semen puede hallarse infectado y transmitir la infección. Dado que algunos sementales ovinos de alto valor genético pueden estar infectados (según ELISA y PCR en sangre), es importante averiguar si su semen puede utilizarse en I.A. sin transmitir el VMV, y si esto ocurre cuando el semen es PCR negativo. Para ello, se utilizaron dos sementales, uno negativo (ELISA y PCR) en sangre y semen y otro asintomático establemente positivo (ELISA y PCR) en sangre pero PCR negativo en semen. En ambos sementales se verificó la negatividad del semen por PCR utilizando diferentes métodos de aislamiento, fraccionamiento y extracción de ADN. También se realizó un estudio citológico del semen y se verificó la ausencia de infección mediante inmunocitoquímica (proteína vírica p25). Tras I.A. de 19 ovejas con el semen de estos moruecos (9 de ellas con el del semental seropositivo) y su análisis periódico (a los -15, -2, 0, 1, 4, 6, 8, 11, 13, 15, 19, 22, 26, 30, 41, 56, 85, 103, 124, 160, 171, 202 y 280 días de la I.A.), se observó en todas ellas negatividad a ELISA y PCR, siendo por tanto el riesgo epidemiológico de transmisión muy reducido en dichas condiciones. Las PCRs empleadas, incluyendo una PCR semi-cuantitativa desarrollada en este estudio para estirpes de campo, permiten la selección de semen libre de virus y de sementales con baja carga vírica en sangre.