Nuevas estrategias para el aislamiento y la identificación del patógeno humano y de anguila Vibrio vulnificus serovar E

 

Carmen Amaro

 

Departamento de Microbiología y Ecología de la Universidad de Valencia. Valencia 46100.

 

Vibrio vulnificus serovar E (VSE) es una bacteria patógena que produce tanto epizootias de elevada mortalidad en anguilas cultivadas como infecciones esporádicas en el hombre (1). Esta serovariedad pertenece al biotipo 2 de la especie V. vulnificus, el cual incluye todas las cepas que son virulentas para peces. Las cepas VSE se han aislado de muestras clínicas, tejidos humanos y de pez, procedentes de Europa, Australia y América pero no de muestras ambientales. La razón principal es que los protocolos de aislamiento e identificación desarrollados para V. vulnificus (2,5) no funcionan con las cepas VSE (4). Para solventar estos problemas, hemos desarrollado un protocolo completo de aislamiento e identificación útil en estudios epidemiológicos y en detección de animales portadores sanos. El procedimiento de aislamiento es un protocolo en dos pasos cuyo elemento clave es el caldo de enriquecimiento selectivo usado en el primer paso, el caldo ESB-1 (eel serum broth, 1% NaCl). Este caldo contiene suero fresco de anguila como único componente selectivo y nutritivo (4). Para la identificación hemos diseñado una PCR múltiple que usa cebadores específicos de la especie V. vulnificus, del biotipo 2 y de la serovariedad E. Las secuencias específicas de biotipo 2 y de serovar E se sleccionaron tras comparar los genomas completos de cepas de serovar E virulentas con los de cepas no virulentas por hibridación sustractiva y constatar su especificidad por PCR con un panel de más de 150 cepas pertenecientes a la misma especie pero de distintos biotipos y serovares, virulentas y no virulentas, así como a otras especies que pueden co-aislarse de los mismos ambientes (3). Se seleccionaron las agallas como órgano a muestrear en la detección de portadores, tras infectar anguilas a través del agua y comprobar que el patógeno se acantonaba en las agallas de los animales supervivientes. El protocolo de aislamiento e identificación a partir de agua y animales ha sido validado en estudios de campo en los que hemos aislado cepas VSE virulentas de agua del Delta del Ebro, de agua de tanque de piscifactoría y de anguilas cultivadas sanas. Nuestros resultados demuestran que las cepas VSE están presentes en el ambiente acuático y que solo con procedimientos adecuados de aislamiento e identificación se podrá poner de manifiesto su relevancia real como patógeno del hombre y animales.

1.  Amaro, C., and E.G. Biosca. 1996. Vibrio vulnificus biotype 2, pathogenic for eels, is also an opportunistic pathogen for humans Appl. Environ. Microbiol. 62: 1454-1457. http://aem.asm.org/cgi/reprint/62/4/1454.pdf.

2.  European Commission:health and consumer protection directorate-general. Sept. 2001. Opinion of the Scientific Commitee on Veterinary Measures relating to Public Health on Vibrio vulnificus and Vibrio parhaemolyticus. http://europa.eu.int/comm/food/fs/sc/scv/out45_en.pdf

3.  Lee, C.T., Amaro, C., Sanjuán, E. and L.I. Hor. Identification of DNA sequences specific for Vibrio vulnificus biotype 2 by suppression subtractive hybridization. Enviado para su publicación a la revista Appl. Environ. Microbiol.

4.  Sanjuan, E. and C. Amaro. 2004. A protocol for the specific isolation of virulent strains of the eel pathogen Vibrio vulnificus serovar E from environmental samples: development and field studies. Appl. Environ. Microbiol. 70:7024-7032. http://www.blackwellpublishing.com/abstract.asp?ref=1462-2912&vid=6&iid=4&aid=5&s=&site=1.

5.  Vibrio vulnificus Disease Information. 2004. CDC. Division of Bacterial and mycotic diseases  http://www.cdc.gov/ncidod/dbmd/diseaseinfo/vibriovulnificus_g.htm