Fernando González

 

Applied Biosystems, Ronda de Poniente 4, Tres Cantos, Madrid

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En la actualidad, la técnica de PCR cuantitativo en tiempo real, debido a sus indudables ventajas, como la facilidad de empleo, la mayor rapidez y el menor riesgo de contaminación, se ha aplicado con éxito en el campo del diagnóstico clínico y de la investigación básica para la detección y cuantificación de virus y bacterias

Applied Biosystems fue la primera compañía en trabajar con un sistema de PCR en tiempo real (Abi Prism 7700) y usar esta tecnología para detectar y cuantificar agentes infecciosos.

Cuantificación Absoluta

Entre las diferentes aplicaciones que se pueden llevar a cabo con los equipos de PCR cuantitativa una de los más importantes es la cuantificación absoluta de muestras de DNA o RNA. La cuantificación absoluta permite medir el número exacto de microorganismos a partir de un DNA/RNA estándar previamente cuantificado.

Ensayos de detección-ausencia DNA: Salmonella, Listeria, E. Coli 0157:H7 y Campylobacter

Los equipos de PCR cuantitativa también se pueden usar para detectar ausencia o presencia de un DNA o RNA. En este tipo de ensayos se coamplifica en un mismo tubo el DNA problema y un DNA exógeno que se introduce artificialmente en el tubo. Este DNA exógeno (el control interno positivo (IPC)) permite confirmar una amplificación negativa de la muestra a testar.

Los nuevos kits de detección de patógenos de Applied Biosystems (Salmonella, Listeria, E. Coli 0157:H7 y Campylobacter) permiten la amplificación y detección específica del DNA bacteriano de forma rápida, en contraste con los métodos tradicionales de cultivo en placa que requieren de 2-7días para detectar la presencia de una bacteria.

Las reacciones de amplificación se realizan en un volumen final de 50 ml a partir de 10fg-1ng de DNA. Los 4 kits tienen un rango linear de 7 log y detectan hasta 1-10 equivalentes genómicos con una eficiencia genómica del 95-100%. La PCR master mix ha sido optimizada y es resistente a los inhibidores más comunes. Además, en todas las reacciones se amplifica en multiplex un control interno positivo.

Otra gran ventaja de nuestro sistema de PCR cuantitativo es la posibilidad de cuantificar y/o detectar a la vez (en una misma placa) diferentes agentes infecciosos de interés clínico gracias a que todos los ensayos se amplifican usando las mismas condiciones de termociclador.

En conclusión, la gran sensibilidad, simplicidad y reproducibilidad de los equipos de extracción de ácidos nucleicos y PCR cuantitativa de Applied Biosystems permiten la cuantificación / detección de un gran número de muestras simultáneamente; esto, unido al amplio rango dinámico, a la sensibilidad y especificidad de los kits de detección de patógenos (Salmonella, Listeria, E. coli 0157:H7 y Campylobacter) convierte la PCR cuantitativa en tiempo real en el método más fiable de detección de microorganismos.