Mónica Monte, José Mª Serrano y Ana de la Cruz

 

Eppendorf Ibérica

 

La técnica de PCR es actualmente uno de los métodos más usados en diversas disciplinas relacionadas con la Microbiología, hasta el punto de que hoy en día es un método ampliamente aceptado para la detección de ácidos nucleicos y se ha convertido en una técnica estándar también en los laboratorios de Microbiología. La reciente aparición de la PCR a tiempo real o PCR Cuantitativa ha provocado una mayor aceptación aún de esta técnica, porque es más rápida, más sensible, más reproducible y los riesgos de contaminación se han minimizado considerablemente.

El desarrollo de nuevos instrumentos que permiten la monitorización de la fluorescencia en cada uno de  los pocillos de las placas de PCR ha significado un gran avance. Los análisis por PCR a tiempo real pueden ser completados de forma rápida y no requieren tratamiento post-PCR. El análisis de la progresión de la reacción permite cuantificaciones precisas en comparación al tradicional análisis por gel de electroforesis.

Desde la aparición de los primeros equipos en los años 90  hasta el día de hoy, han ido surgiendo numerosos avances tales como velocidades más altas, mayor número de muestras, flexibilidad, sistemas de detección mejorados y software de tratamiento de datos de  fácil manejo.

La optimización de los reactivos usados en PCR a tiempo real, es crítica para la obtención de resultados reproducibles. Como en la PCR convencional todo aquello que optimize la pre-PCR será beneficioso a largo plazo. Un ensayo de PCR a tiempo real optimizado no presentará variaciones pocillo a pocillo , ni contaminaciones cruzadas, además de proporcionar resultados de máxima especificidad, sensibilidad y eficiencia. En este sentido, esta técnica se ha visto además mejorada por el desarrollo de pequeñas estaciones de manejo de líquidos, capaces de preparar las muestras a analizar con los reactivos correspondientes, de forma precisa, reproducible y sin contaminaciones. La novedosa línea epMotion® de estaciones de manejo de líquidos permiten la preparación de la placa PCR de forma precisa y sin contaminación, con todo tipo de fungible y un amplio rango de volúmenes.

En cuanto a la química de las técnicas de detección, existe una una gran variedad en el mercado, algunas de las cuales se discutirán en detalle.

Eppendorf siguiendo desde hace 60 años la filosofía de sus fundadores, los doctores  Heinrich Netheler y Hans Hinz, de mejorar las condiciones de vida humana, a través de la innovación y alta calidad de sus productos, ha incorporado las ya probadas ventajas del Mastercycler® ep gradient en un sistema de PCR a tiempo real, Mastercycler® ep realplex, con licencia, y cumpliendo todos los requisitos necesarios para las aplicaciones más exigentes de la PCR a tiempo real.

El ahorro de tiempo y espacio han supuesto factores importantes en su desarrollo, así como la protección de las muestras y el fácil manejo del sistema.

La introducción de la PCR a tiempo real en los laboratorios  ha significado una clara mejora en el diagnóstico de enfermedades en estados tempranos, así como en el seguimiento de tratamientos. Desde su aparición ha habido un creciente interés en esta técnica y cientos de artículos han sido publicados al respecto describiendo aplicaciones en Parasitología, Virología y Bacteriología, tanto en el área de diagnóstico como la investigación. Igualmente cada vez es más común encontrar equipos de PCR en el análisis rutinario de agua y en la industria agroalimentaria.