Mesa Redonda: Normalización de métodos microbiológicos: del cálculo de la incertidumbre a la validación de métodos

 

Ensayos de equivalencia interlaboratorio de métodos de detección para coliformes y Escherichia coli

 

Ferran Ribas

 

Aigües de Barcelona, AGBAR fribas@agbar.es

 

Bajo los auspicios de Sociedad Española de Microbiología (SEM) y de la Asociación Española de Abastecimiento y Saneamiento (AEAS), se están llevando a cabo tres ejercicios interlaboratorio para evaluar la equivalencia entre el método de análisis de bacterias coliformes y E.coli, basado en la norma ISO 9308-1:2000 y especificado por la Directiva 98/83/CE del Consejo de la Unión Europea, y otros métodos habitualmente utilizados para analizar esos mismos microorganismos en diversos laboratorios españoles. Los métodos seleccionados han sido el Colilert, los cromogénicos (Chromocult) y el m-Endo/m-FC. El objetivo de estos estudios es que, si los ejercicios se desarrollan con éxito, los métodos comparados sean aprobados como alternativos en el Estado español, tras la autorización de la Unión Europea, asesorada por un grupo de expertos en microbiología (EMAG) en el que están representados los principales países europeos.

Los ejercicios de equivalencia se realizan de acuerdo con un procedimiento recientemente aprobado (ISO 17994:2004). No se llevan a cabo envíos de muestras entre laboratorios, sino que cada laboratorio se prepara sus propias muestras de acuerdo con idénticos protocolos (muestras estresadas). Se analizan con ambos métodos a comparar alícuotas del mismo volumen de la misma muestra en el mismo frasco. Una vez efectuados los análisis, se estudia la diferencia relativa media entre ambos métodos utilizando siempre los recuentos confirmados. Los tests de equivalencia estándar utilizan para ambos métodos los criterios de confirmación de la norma ISO. De acuerdo con esos criterios, tanto el Colilert como el Chromocult proporcionan recuentos significativamente más altos que el método ISO para el análisis de bacterias coliformes. Es muy probable que también el m-Endo proporcione resultados significativamente superiores. En cambio, para E.coli  se pone en evidencia que el criterio de la norma ISO (indol-positivos) proporciona un elevado número de falsos positivos, dando la falsa impresión de que el método basado en dicha norma da resultados significativamente superiores. No obstante, con la utilización de criterios de identificación alternativos (MUG), contrastados en estudios paralelos, se ha conseguido mostrar que el Colilert recupera significativamente más auténticas E.coli que el método basado en la norma ISO y que el Chromocult es equivalente al TTC.