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Dpto. Tecnología de Alimentos, INIA, Ctra. de La Coruña km 7, 28040 Madrid mmedina@inia.es
Las sales biliares son sintetizadas en el hígado a partir de colesterol y secretadas al intestino delgado como conjugados con glicina o taurina. Su desconjugación por la actividad enzimática de bacterias intestinales se ha relacionado con la reducción de los niveles de colesterol sérico. Nuestro objetivo ha sido investigar la actividad hidrolasa de sales biliares (BSH) de bacterias lácticas y bifidobacterias aisladas de heces de lactante y su capacidad para coprecipitar el colesterol en medio de cultivo con sales biliares.
Se partió de aislados de lactobacilos (11), enterococos (1) y bifidobacterias (14) y 4 cepas probióticas comerciales. La actividad BSH se determinó mediante un ensayo en placa de agar MRS o RCM con un 0.5% de la sal sódica del ácido taurodesoxicólico (TDC) y 0.37 g/l de CaCl2. La cuantificación de la actividad en caldo con 5 mM de TDC o GDC (sal sódica del ácido glicodesoxicólico) tras 24 h de incubación en anaerobiosis se realizó por HPLC, analizando el contenido de la sal biliar correspondiente en el sobrenadante de los cultivos.
La coprecipitación de colesterol en caldo con y sin sales biliares (TDC o GDC) se determinó mediante un ensayo colorimétrico después de la extracción de los cultivos, con reactivo de OPA y lectura a 550 nm. El colesterol coprecipitado se calculó como la diferencia entre el colesterol en el sobrenadante del caldo sin sales biliares después de la incubación y el colesterol presente en el sobrenadante del caldo con las sales biliares.
En los ensayos en placa, únicamente se detectó actividad BSH en Enterococcus faecalis PRO 289, así como en 11 de los 14 aislados de Bifidobacterium. Cuando se investigó la actividad BSH en caldo con TDC, tanto Lactobacillus mucosae PRO 459 como E. faecalis PRO 289 redujeron drásticamente el TDC presente. El resto de lactobacilos crecieron en dicho medio, aunque no hidrolizaron el TDC. Sin embargo, en caldo con GDC, únicamente crecieron los aislados mencionados, que como en el caso anterior redujeron el GDC a valores inferiores a 0.1 mM. Todas las bifidobacterias hidrolizaron las dos sales biliares, con valores residuales entre 1-50% de los valores iniciales.
Se observó la reducción de colesterol hasta aproximadamente un 50% en el medio de cultivo con E. faecalis PRO 289 y L. mucosae PRO 459 en presencia de TDC o GDC. Esta disminución fue del 40-90% para las bifidobacterias en caldo con TDC y del 80-90% en caldo con GDC.
La capacidad de nuestros aislados de hidrolizar sales biliares y reducir el colesterol deberá investigarse in vivo para determinar su potencial probiótico.