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Laboratorio de Salud Pública del Principado de Asturias. Camino de Rubín s/n. 33011 Oviedo. Asturias. margabg@princast.es.
Los métodos convencionales de detección e identificación de patógenos en alimentos requieren un mínimo de 4 ó 5 días en su ejecución. El sistema A-BAX desarrollado por DuPont-Qualicon está basado en la amplificación en cadena de la polimerasa (PCR) y acorta su detección a 24-48 horas. El objeto de este estudio es evaluar la eficiencia de este sistema en un programa de Salud Pública para la investigación de Salmonella spp. en diversos productos alimenticios.
Durante los años 2004 y 2005 se han analizado en el Laboratorio de Salud Pública del Principado de Asturias 263 muestras de alimentos por el sistema A-BAX (198 en 2004 y 65 en 2005). Con el fin de evaluar la eficiencia del sistema para utilizarlo como método de cribado, en el año 2004 se procesaron 46 muestras de alimentos (23 crudos y 23 elaborados) en paralelo con el equipo A-BAX y con técnicas de cultivo, basadas en la Norma ISO.6579:1993 modificada.
El protocolo de trabajo con el sistema A-BAX, se resume en los siguientes pasos: Enriquecimiento selectivo de acuerdo a las técnicas del Laboratorio (18 horas), enriquecimiento secundario en BHI (3 horas), extracción con una proteasa (30 minutos), amplificación y detección en el equipo (3 horas y media) y por último visualización de los resultados en la pantalla. Todos los reactivos utilizados en la realización de la PCR (iniciadores, enzima y desoxiribonucleotidos) están incluidos en una tableta liofilizada. La tableta también incluye un control interno de amplificación y un colorante fluorescente que se une al ADN problema emitiendo una señal en respuesta a la luz, detectada por el equipo A-BAX. Durante la fase de detección se eleva la temperatura de las muestras hasta la desnaturalización disminuyendo la fluorescencia emitida. Este cambio en la señal se puede representar frente a la temperatura y generar unas curvas de fusión únicas y características de cada microorganismo que son interpretadas por el software del A-BAX.
El equipo A-BAX emite los resultados como positivo/negativo. En este estudio los resultados positivos fueron confirmados a partir del caldo BHI para ser considerados como verdaderos positivos. De las 46 muestras analizadas con los dos métodos, 23 fueron positivas y 22 negativas con ambos, solo una tuvo un resultado con discrepancias. El sistema A-BAX mostró un 100% de sensibilidad con respecto al método clásico, un 95,7% de especificidad, 4,2% de falsos positivos, 0% de falsos negativos y una eficiencia global del 97,8%.
A la vista de estos resultados, consideramos el sistema A-BAX (DuPont-Qualicon) válido para el screening de Salmonella en alimentos por su alta sensibilidad, con el valor añadido de utilizar una tecnología moderna, su rapidez (25 horas) y no necesitar el usuario conocimientos de Biología Molecular por su sencillez en el manejo y ser un equipo cerrado a cualquier influencia externa.