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Escuela de Ingenierías Agrarias, Dpto. Zootecnia, Área de Nutrición y Bromatología Universidad de Extremadura, Ctra. Cáceres s/n 06071 Badajoz. srmsh@hotmail.com.
El pimentón presenta unas características fisico-químicas que impide desarrollo de la mayor parte de microorganismos, aunque si pueden crecer mohos y levaduras. Entre los mohos se pueden encontrar cepas capaces de producir micotoxinas. La caracterización de la población fúngica mediante métodos clásicos presenta entre otros inconvenientes, elevado tiempo de análisis, gran subjetividad y alto grado de entrenamiento. La técnica de PCR-RFLP es adecuada para la caracterización de los mohos por su sensibilidad, especificidad y rapidez. Dentro de la información genética de los mohos, las regiones ITS son fáciles y rápidas de amplificar y presentan variabilidad interespecífica, por lo que serían adecuadas para la caracterización de los mohos a nivel de género y especie. Por tanto, los objetivos de este trabajo son:
- Optimizar la técnica de PCR-RFLP para la identificación de especies fúngicas.
- Identificación mediante PCR-RFLP de los mohos aislados de pimentón
Para realizar el presente trabajo se aislaron 23 cepas de mohos mayoritarios, procedentes de cinco variedades de pimentón. Además para optimizar la técnica de PCR-RFLP se utilizaron 17 cepas patrón de la CECT. Para la PCR se utilizaron la pareja de cebadores ITS1-ITS4 e ITS4-ITS5. Posteriormente se realizó el corte con las enzimas de restricción Eco RI, Sma I, Hinf I, Sau 3AI y Taq I.
El mayor número de bandas y de mayor intensidad se obtuvo con la enzima Taq I. La técnica de PCR-RFLP con los cebadores ITS1-ITS4 permitió diferenciar los géneros Penicillium, Aspergillus y Fusarium, pero no mostró perfiles de bandas diferentes entre los géneros Alternaria y Cladosporium. Además especies del género Penicillium y del género Fusarium mostraron perfiles de bandas idénticos. Por su parte la técnica de PCR-RFLP con la pareja de cebadores ITS4-ITS5 mostró perfiles de bandas diferentes entre los distintos géneros de cepas patrón de la CECT ensayadas, también se observaron perfiles de bandas diferentes entre especies del mismo género. Por último, con los cebadores ITS4-ITS5 los 23 mohos aislados fueron identificados: como Penicillium raistrickii, P. griseofulvum, P. brevicompactum, P. expansum, Fusarium tricintum, F. verticillioides, F. sporotrichum, F. graminearum y Cladosporium cladiosporoide. Conclusiones obtenidas:
1. Las mayores diferencias a nivel de género y de especie de las cepas patrón ensayadas se obtuvieron con la pareja de cebadores ITS4-ITS5 y con la enzima Taq I.
2. La técnica de PCR-RFLP con los cebadores ITS4-ITS5 y la enzima TaqI permitió caracterizar adecuadamente los aislamientos obtenidos del pimentón.
3. La técnica de PCR-RFLP, por su especificidad y sensibilidad, puede ser utilizada como método de monitorización en un sistema APPCC para detectar mohos toxigénicos durante el procesado.