Detección de cepas de Psychrobacter mediante la detección del gen lip 1 por la técnica de PCR.

García-López, I., Rodriguez- Calleja, J.M. , Martinez-Arias, O., Santos, J.A. y García-López, M.L.

Área de Nutrición y Bromatología. Dpto de Higiene y Tecnología de los Alimentos.Facultad de Veterinaria. Universidad de León. 24071-León. dhtigl@unileon.es

Psychrobacter spp, género perteneciente a la familia Moraxellaceae, está formado por cocobacilos Gram-negativos, inmóviles, aerobios estrictos que se encuentran en ambientes naturales y alimentos proteicos refrigerados como agentes alterantes de éstos. En cuanto a su aislamiento a partir de alimentos, aparecen junto con el resto de la microbiota psicrotrofa en los medios para recuentos generales pero pasan fácilmente desapercibidos al no poseer las colonias características diferenciales. Además, por sus caracteres fenotípicos se confunden fácilmente con cepas de Pseudomonas aparentemente inmóviles. Por tanto, son necesarias técnicas microbiológicas que faciliten su detección con el fin de poder llevar a cabo estudios en profundidad sobre su papel en la alteración de los alimentos.

El objetivo de este trabajo es diseñar una técnica de PCR que nos permita detectar el gen lip 1 en cepas de Psychrobacter immobilis y así poder diferenciar este género de posibles competidores.

A partir de la secuencia del gen lip 1 que codifica la producción de lipasa en la cepa Psychrobacter immobilis B10 (Arpigny et al., 1993. Biochim. Biophys Acta. 1171:331-333). se diseñaron varios pares de cebadores algunos de los cuales mostraron gran especificidad para las especies del género Psychrobacter.

Se estudiaron 28 cepas, 15 de las cuales procedían de la Colección Belga (BCCM/LMG), 10 fueron aisladas por nosotros a partir de muestras de carne de conejo y moluscos bivalvos, la cepa tipo de Aeromonas hydrophila (microorganismo psicrotrofo y lipolítico) y 2 cepas de Pseudomonas fragi que por sus características fenotípicas se confunden fácilmente con cepas de Psychrobacter immobilis.

Utilizando los cebadores si36 (cgg cgc aat cag tgt ggc tta tg) y si37 (act tgt gct tgc ggg atg att ttt) que amplifican un fragmento de 420 pares de bases del gen lip 1, se detectó la presencia de dicho gen en 12 de las 15 cepas de colección y en todas las que fueron aisladas por nosotros. Por el contrario, todas las cepas de Aeromonas y Pseudomonas resultaron ser negativas.

La técnica de PCR diseñada en este trabajo permite la detección rápida y específica de cepas de Psychrobacter potencialmente alterantes de alimentos.

Este trabajo ha recibido financiación de la CICYT (Proyecto AGL2000-1159)