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Detección de Penicillium brevicompactum mediante PCR

Patiño, B., Doménech, M.¹, González-Salgado, A., Jurado, M., López-Errasquín, E., González-Jaén, M.T.², Jiménez, M. y Vázquez, C.

¹Dpto. de Microbiología III y de ²Genética. Facultad de Biología. Universidad Complutense de Madrid. ³Dpto. de Microbiología y Ecología de la Universidad de Valencia. belenp@bio.ucm.es

Penicillium brevicompactum Dierckx es un hongo ubicuo que se ha aislado de aire, uvas, manzanas, queso, anacardo,  pimienta y nueces entre otros hábitat. Se ha descrito como productor de diferentes micotoxinas entre las que destaca el ácido micofenólico, la brevianamida A  y más recientemente la patulina. 

La mayoría de los hongos filamentosos y entre ellos las especies de Penicillium, se han clasificado mediante claves basadas en caracteres morfológicos (macro y micromorfología, coloración en diferentes medios, etc). Muchos autores han puesto de manifiesto que estos criterios son subjetivos y altamente variables y en muchos casos conllevan una clasificación errónea o ambigua. Actualmente se están introduciendo otros criterios de clasificación como perfiles de metabolitos secundarios, detección de enzimas específicas, patrones de isoenzimas y más recientemente la caracterización genotípica (RFLPs, secuenciación del rDNA, RAPDs).

En el presente trabajo se ha realizado un muestreo de uvas de la Rioja, prestando especial atención a los aislamientos de Penicillium brevicompactum en los que se ha estudiado la capacidad de producir ácido micofenólico. Hemos  aislado, en uva tempranillo, dos cepas  de P. brevicompactum (A y U)  que producen 130,5 y 180,3 mg/ml de micofenólico respectivamente. Dicha producción se ha estudiado en medio YES con o sin suplemento de  zumo de uva, sin observarse diferencias significativas en la  concentración de ácido micofenólico.

Asimismo, dado que son hongos de gran interés con una taxonomía difícil y controvertida, se ha desarrollado un método de diagnóstico por PCR, específico para P. brevicompactum, basado en la región ITS del rDNA. Se han diseñado dos cebadores específicos BRE1 y BRE2 situados en la región ITS1 e ITS2 respectivamente. Esta técnica aplicada a la caracterización y detección de cepas fúngicas ofrece rapidez, precisión y sensibilidad y permite obtener información sobre la variabilidad a nivel intraespecífico y su seguimiento epidemiológico.

Este trabajo ha sido financiado por el Ministerio de Educación y Ciencia mediante el proyecto AGL 2004-07549-C05-05/ALI

 

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