Acción de los concentrados proteicos de Lactobacillus plantarum sobre una línea leucémica humana

Puertollano E, Puertollano MA, Cruz-Chamorro L , Álvarez de Cienfuegos G y de Pablo MA

Universidad de Jaén, Facultad de Ciencias Experimentales, Área de Microbiología, 23071 JAEN (Spain). e-mail: mpvacas@ujaen.es

En los últimos años, los probióticos han adquirido una considerable importancia como microorganismos capaces de ejercer un efecto beneficioso sobre la salud, por ejemplo en la prevención y en el tratamiento de desórdenes intestinales, en la modulación de la respuesta inmune o en la reducción del riesgo de cáncer. Hasta el momento se han propuesto diferentes mecanismos de acción de los probióticos, los cuales incluyen la regulación de la producción de citoquinas, aumento de la secreción de inmunoglobulina A, producción de sustancias con actividad antibacteriana, aumento de la integridad de la barrera intestinal o la competición con microorganismos enteropatógenos. En el presente trabajo hemos tratado de determinar los efectos que los concentrados proteicos derivados de estos microorganismos ejercen sobre una línea leucémica humana. Para ello se han concentrado las fracciones proteicas de Lactobacillus plantarum mediante centrifugación (Centricon plus-20, Millipore) y seguidamente se han determinado la acción de los concentrados proteicos en la línea leucémica humana HL-60. Diferentes parámetros fueron cuantificados como la viabilidad celular mediante la técnica colorimétrica con MTT, los efectos citotóxicos medidos a través de la liberación de lactato deshidrogenasa (LDH) y finalmente la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) mediante el marcaje de las células con 2´,7´dichlorodihydrofluorescein diacetate (H₂DCFDA), el cual se oxida por la acción de H₂O₂ y produce una reacción fluorescente. Los efectos que las fracciones proteicas de L. plantarum ejercen sobre la viabilidad celular de la línea celular HL-60 demuestran que concentraciones superiores a 50 µg/ml dan lugar a una reducción considerable de este parámetro, siendo superior al 95% cuando la concentración es de 100 µg/ml. En cambio, la liberación de LDH medida como alteración de la membrana celular indicó que los concentrados proteicos procedentes de L. plantarum no ejercen ningún efecto sobre la integridad de la membrana. Por otra parte, la producción de ROS fue sorprendentemente reducida y de forma progresiva con el aumento de la concentración de proteínas, de manera que una concentración de 100 µg/ml indujo un descenso significativo en la producción de ROS.

Los concentrados proteicos obtenidos a partir de L. plantarum son capaces de generar una alteración de las funciones mitocondriales y por tanto una pérdida de la viabilidad celular, pero sin la alteración de la integridad de membrana. Además, las proteínas obtenidas de esta bacteria inducen muerte celular a través de un mecanismo independiente de la generación de ROS, sin aumentar el estado de oxidación.