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1Instituto Cavanilles de Biodiversidad y Biología Evolutiva, 2Departamento de Microbiología y Ecología, y 3Colección Española de Cultivos Tipo (CECT). Universitat de València. Campus de Burjassot. 46100 València, España. macianro@uv.es
Vibrio harveyi es la especie de Vibrio mayoritaria en agua y bivalvos en la costa del Mediterráneo español durante la época cálida. Es patógeno de crustáceos y de peces cultivados (lubina, salmón, caballito de mar). Nuestro grupo ha encontrado que es la especie mayoritaria asociada a órganos internos de doradas y lubinas, tanto enfermas como asintomáticas (Pujalte et al. 2003a; Pujalte et al. 2003b).
En este trabajo hemos aplicado la técnica de RAPD, utilizando dos cebadores universales (M13 y T7), a un total de 88 aislados y 9 cepas de referencia que incluyen las cepas tipo de las especies V. harveyi y V. campbellii. Estas dos especies son fenotípicamente indistinguibles y sólo se pueden diferenciar mediante hibridación DNA-DNA y con técnicas moleculares como (GTG)5-PCR (Gómez-Gil et al. 2004). El análisis conjunto de RAPD-M13 y RAPD-T7 se realizó con el programa informático GelCompar v4.1, aplicando el coeficiente de Pearson y el método de agrupamiento UPGMA, y los resultados fueron los siguientes:
1) Al 46 % de similitud se forman 3 grupos y queda una cepa de dorada sin agrupar; uno de los grupos, formado por 22 cepas, incluye 14 cepas aisladas de lubina (sorbitol -), la cepa tipo de V. campbellii NCIMB 1894T y otros V. campbellii de referencia; el segundo grupo, formado por 4 cepas, es periférico al grupo de V. campbellii; el resto de las cepas (70) forman un grupo bastante homogéneo en el que está incluida la cepa tipo de V. harveyi NCIMB 1280T.
2) No se ha observado relación entre la tipificación molecular (RAPD) y fenotípica (fermentación del sorbitol), ni con la capacidad patógena sobre la lubina.
3) La técnica de RAPD (con el cebador M13 o la aplicación conjunta de ambos cebadores) ha permitido hacer el seguimiento de una cepa virulenta de V. harveyi utilizada en ensayos de virulencia, permitiendo distinguir la cepa experimental de otras de la misma especie presentes en los peces ensayados.
4) El agrupamiento obtenido coincide, en líneas generales, con el resultante de aplicar una técnica molecular mucho más potente como la (GTG)5-PCR (ver póster de Pascual y col. en el área temática de Taxonomía, Filogenia y Biodiversidad).
Agradecimientos: las cepas de referencia de V. campbellii han sido cedidas por el Dr. Gómez-Gil (Collection of Aquacultural Important Microorganisms, CAIM, México).
Bibliografía:
Gómez-Gil et al. (2004). Microbiology 150, 1769-1777.
Pujalte et al. (2003a). Syst Appl Microbiol 26, 284-292.
Pujalte et al. (2003b). Dis Aquat Org 54, 119-126.