MÉTODO PARA EL ANÁLISIS DE MÚLTIPLES MICOTOXINAS EN
ALIMENTOS MEDIANTE HPLC-MS
Félix Núñez Breña, Raquel
Acosta Guerrero, María J. Sosa Zuil, Miguel A. Asensio Pérez, Elena
Bermúdez Polo
Higiene de los Alimentos, Facultad de Veterinaria,
Universidad de Extremadura, Cáceres, España
Diferentes
mohos toxigénicos pueden producir toxinas en alimentos mantenidos a
temperatura ambiente, como jamón, embutidos y quesos. Existe una
gran diversidad de métodos de detección con sensibilidad adecuada
para las exigencias legales, pero disponibles para un limitado
número de micotoxinas, y no permiten el análisis de varias
micotoxinas simultáneamente en estos productos.
El objetivo
del trabajo es diseñar una metodología basada en HPLC-MS para la
detección e identificación simultánea de diversas micotoxinas en
jamón, embutidos y quesos.
Se ha diseñado un método para la
separación de 13 micotoxinas producidas por especies de mohos
habituales en alimentos: aflatoxinas B1 y G1, ocratoxina A,
citrinina, roquefortina, esterigmatocistina, ácidos ciclopiazónico,
micofenólico y secalónico, fumitremorgina B, griseofulvina, paxilina
y verruculógeno.
El método resultante ha sido de 40 min con
fases móviles agua y 0,05% ácido trifluoroacético en acetonitrilo en
gradiente a flujo de 0,8 ml/min. Utilizando este método se han
elaborado curvas patrón para las micotoxinas con correlaciones
superiores a 0,99.
Para su ensayo se añadieron diversas
concentraciones de una mezcla de micotoxinas a queso, salchichón y
jamón. Las muestras se homogenizaron con 60 ml de 0,1% de ácido
fórmico en acetonitrilo:agua (9:1) y 50 ml de hexano. Tras 1 h en
agitación se pasaron a embudo de decantación y se separó la fase del
acetonitrilo, que se evaporó. El extracto se resuspendió en 0,5 ml
de acetonitrilo y se analizó por HPLC-MS. Se detectaron las
micotoxinas añadidas en concentraciones inferiores a 1 ppm. A
menores niveles (ng/g) no se detectaron en ningún sustrato el ácido
micofenólico y la citrinina y en queso y embutido tampoco los ácidos
secalónico y ciclopiazónico. Por lo tanto, el método diseñado
permite la detección de una gran diversidad de micotoxinas de forma
simultánea, aunque debido a los límites que para este tipo de
toxinas aparecen en la legislación es necesario optimizar la
extracción y purificación para aumentar la sensibilidad con algunas
de ellas.
Agradecimientos: Este trabajo ha sido realizado
dentro del proyecto 2PR02A051, cofinanciado por la Consejería de
Educación, Ciencia y Tecnología de la Junta de Extremadura y el
Fondo Social Europeo. R. Acosta es beneficiaria de una beca FPI del
Ministerio de Ciencia y
Tecnología.
|