A - 153
1Dpto.Microbiología y Ecología. Facultad de Biología, Universitat de València. 2Dpto. Química Analítica. Facultad de Química, Universitat de València. 3Colección Española de Cultivos Tipo (CECT). Universitat de València. Dr. Moliner 50, E-46100, Burjassot, Valencia, España.
La incidencia de ocratoxina A (OTA) en vino ha despertado un gran interés en los últimos años. Estudios realizados en nuestro laboratorio han puesto de manifiesto que la toxina se encuentra en un 64% de los vinos comercializados en España. En consecuencia, la caracterización y control de los hongos responsables de su producción en uva es una tarea prioritaria.
En este trabajo se estudia la micobiota de cinco variedades de uvas cultivadas en España, todas ellas empleadas en la elaboración de vinos de reconocidas denominaciones de origen. Cuatro variedades fueron de uva roja (Bobal, Tempranillo, Garnacha y Monastrell) y una de uva blanca (Moscatel).
Los hongos que presentaron mayor incidencia fueron Alternaria spp, Cladosporium spp y Aspergillus spp. En base a los perfiles de producción de OTA fue, sin duda, muy destacable la incidencia de Aspergillus de la sección Nigri ya que el 82% de las muestras estuvieron contaminadas con estos hongos. Por ello, el estudio se centró en esta sección de Aspergillus.
La caracterización de las especies del agregado A. niger (A. niger, A. tubingensis) se realizó mediante amplificación por PCR de la región ITS1-5.8S-ITS2 del rDNA seguido de su digestión con la endonucleasa Rsa1. Esta caracterización fue confirmada mediante secuenciación. La producción de OTA por los diferentes aislamientos fue ensayada utilizando como medio de cultivo sacarosa-extracto de levadura (YES) suplementado con un 5% de polen de abeja para favorecer la biosíntesis de la toxina. El análisis de OTA en los cultivos fue realizado mediante cromatografía líquida con detector de fluorescencia (LC-FLD). La confirmación de la presencia de la toxina se llevó a cabo mediante cromatografía líquida con detector de espectrometría de masas con trampa de iones (LC-MS-MS).
Los resultados obtenidos a partir de los cultivos in vitro de 205 aislamientos de Aspergillus de la sección Nigri mostraron que el 74,2% de los aislamientos de A. carbonarius y el 14,3 % de los aislamientos de A. tubingensis eran capaces de producir OTA a niveles comprendidos entre 1,2 y 3531 ng/ml, y entre 46,4 y 111,5 ng/ml, respectivamente. Sin embargo, ningún aislamiento de A. niger presentó capacidad productora de OTA en las condiciones empleadas. Los resultados obtenidos también indicaron la existencia de diferencias significativas en los niveles de incidencia de hongos ocratoxigénicos en función de la variedad de uva.
En este trabajo se describe por primera vez a la especie Aspergillus tubingensis como productora de OTA así como la influencia de la variedad de uva en la incidencia de hongos productores de esta toxina.
Este trabajo ha sido financiado por el Ministerio de Educación y Ciencia, proyecto AGL 2004-07549-C05-02/ALI y por la Generalitat Valenciana, proyecto GV04B-111 y beca FPI, por lo que los autores manifiestan su agradecimiento.