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Dpto. Inmunología, Microbiología y Parasitología. Facultad de Farmacia. Universidad del País Vasco-Euskal Herriko Unibertsitatea. Paseo de la Universidad nº 7, 01006 Vitoria-Gasteiz. E-mail: oibchore@vc.ehu.es
El término campilobacterias hace referencia a bacterias espirales microaeróbicas de difícil cultivo en laboratorio, e incluye patógenos emergentes de los géneros Campylobacter, Arcobacter y Helicobacter. A pesar de no multiplicarse fuera de su huésped habitual, son capaces de sobrevivir periodos largos de tiempo en el ambiente (agua y alimentos), desarrollando el estado viable no cultivable (VNC). Dado el lento crecimiento, los requerimientos de cultivo y la dificultad de interpretación de las escasas pruebas bioquímicas disponibles para la detección e identificación de las campylobacterias, se hace necesario desarrollar metodologías alternativas basadas en la amplificación de los ácidos nucleicos.
Ahora bien, la correlación entre viabilidad celular y persistencia de ácidos nucleicos debe estar bien caracterizada antes de que las técnicas moleculares puedan sustituir a los métodos de cultivo tradicionales.
El objetivo de este trabajo es estudiar el uso del RNA ribosómico como marcador de viabilidad a lo largo de la supervivencia de Campylobacter jejuni. Nuestra hipótesis es que tras un proceso de supervivencia, las células bacterianas VNC mantendrán niveles de RNA similares a los de las cultivables, mientras que en las no viables los niveles de RNA serán no detectables.
Mediante la técnica NASBA a tiempo real con sondas beacon se ha procedido a detectar rRNA de C. jejuni directamente en muestras de pollo exentas de Campylobacter y artificialmente contaminadas con células de C. jejuni en tres estados básicos: cultivables, VNC y muertas por calor en autoclave.
Las muestras inoculadas con células muertas dieron señal negativa, mientras que las inoculadas con células cultivables y VNC dieron señal positiva. Estos resultados indican que el RNA únicamente se conservaría en los casos en los que la célula bacteriana mantiene su integridad. De esta forma queda establecida la correlación entre la detección de RNA y la viabilidad celular. Además, la detección por NASBA a tiempo real es compatible con la detección directa sobre la muestra alimentaria.
Este trabajo forma parte del proyecto AGL2002-04480-C03-02 subvencionado por el Ministerio de Ciencia y Tecnología (MCyT).