A - 93
Departamento de Genética.1 Departamento de Microbiología III. Facultad de Biología. Universidad Complutense de Madrid. C/ José Antonio Novais 2, 28040-Madrid.2 Departamento de Tecnología de los Alimentos, UTPV-CeRTA, Universidad de Lleida. mjuradog@bio.ucm.es
Fusarium es un hongo fitopatógeno capaz de colonizar el maíz, donde puede acumular una gran variedad de micotoxinas, entre ellas los tricotecenos y las fumonisinas. Las principales especies de Fusarium productoras de fumonisinas en maíz son F. verticillioides y F. proliferatum; F. graminearum, es la principal especie productora de tricotecenos en el maíz, aunque se han descrito otras especies como F. culmorum, F. equiseti, F. poae y F. sporotrichioides. La identificación de Fusarium se ha basado tradicionalmente en características morfológicas y fisiológicas, pero estas técnicas son lentas al necesitar el cultivo del hongo; son poco específicas pues no permiten discriminar entre especies filogenéticamente próximas, y en el caso del análisis de muestras secas de maíz, son poco sensibles, al necesitar la presencia de micelio viable, que en el caso de Fusarium, patógeno de campo, decrece rápidamente cuando la planta es recolectada y procesada.
En este trabajo se ha analizado la presencia de especies micotoxigénicas de Fusarium en 150 muestras de maíz español (75 de grano y 75 de harina) contaminado con fumonisinas, en unos rangos que oscilan desde 0.5 hasta 70 ppm. Para ello se ha realizado una identificación molecular mediante una batería de cebadores específicos de especie, previamente diseñados por nuestro grupo, correspondientes a las principales especies de Fusarium asociadas a maíz. Los cebadores fueron diseñados a partir del análisis de secuencias de la región espaciadora intergénica del rDNA (IGS), cuyo carácter multicopia aumenta la sensibilidad con respecto a las secuencias de copia única. La reacción de PCR se lleva a cabo con el DNA extraído de la muestra de maíz sin ser sometida a un tratamiento de enriquecimiento fúngico por incubación. Paralelamente se han llevado a cabo ensayos de PCR para detectar la presencia de los genes de copia única Fum5 y Tri13, necesarios para la síntesis de fumonisinas y tricotecenos respectivamente.
El método empleado ha permitido determinar la presencia de F. verticillioides, F. proliferatum y F. graminearum como especies mayoritarias. Los ensayos de PCR con genes multicopia han detectado un mayor número de muestras positivas que los ensayos con genes de copia única. El método propuesto es rápido y tiene una gran sensibilidad, al ser capaz de detectar como positivas el 100% de las muestras de maíz contaminadas con valores por encima de 10 ppm de fumonisinas.
Este trabajo ha sido financiado por el Ministerio de Educación y Ciencia mediante el proyecto AGL 2004-07549-C05-05/ALI.