Caracterización de actinomicetos endofitos aislados de Pisum sativum

Carro García, L., MartínezMolina, E. y Trujillo, M. E.

Departamento de Microbiología y Genética. C/ Doctores de la Reina S/N. 37007. Salamanca

Pisum sativum es una leguminosa de grano que pertenece a la familia Fabaceaey se cultiva principalmente por sus semillas. Por ello, resulta interesante el estudio de los distintos microorganismos endófitos de esta planta, las funciones que realizan o interacciones que se dan entre ellos.

Para la realización de este estudio se recolectaron plantas de guisante de la localidad de Cañizal (Zamora), que poseían diversos nódulos radicales. Algunos de estos nódulos fueron recogidos y se procedió a su esterilización externa utilizando HgCl₂ (2,5%) durante dos minutos. Posteriormente se trituraron y se sembraron en medio YMA. Las placas se incubaron a 28 ºC entre dos ytres semanas, aislándose veintinueve colonias con aspecto de Actinomicetos.

Seguidamente se procedió a la caracterización fenotípica de los aislados, para ello se realizaron estudios de morfología en diferentes medios de cultivo (SA1, Avena, YMA, Bennett), comprobando el crecimiento, el color del micelio (de sustrato y aéreo) y la existencia de pigmentos difusibles. Se realizaron además, pruebas de crecimiento en distintas fuentes de carbono.

Para profundizar en la caracterización de las cepas aisladas se realizaron perfiles de rep-PCR utilizando el oligonucleótido BOX A1R, que permiten discriminar a nivel intraespecífico. La gran variabilidad de perfiles obtenidos mostró una elevada diversidad entre nuestros aislados. A partir de este punto se seleccionaron algunas cepas para secuenciar el gen ribosómico 16S con el fin de determinar la posición filogenética de estos aislados.