Fototrofía anoxigénica aerobia de la microbiota asociada a la ascidia Cystodytes dellechiajei

Martínez-García, M.  ⁽¹⁾, Díaz, M.⁽²⁾, Ramos-Esplá ⁽²⁾ y Antón, J.⁽¹⁾

(1)Departamento de Fisiología, Genética y Microbiología, Universidad de Alicante. E-mail: m.martinez@ua.es. (2)División de Biología Marina, Universidad de Alicante.

Cystodytes dellechiajei es una ascidia marina que habita en ambientes bentónicos rocosos de hasta 800 metros de profundidad en el Océano Atlántico, Pacífico, Índico y Mar Mediterráneo. Esta ascidia tiene un potencial biotecnológico interesante, ya que se han aislado e identificado varios compuestos con actividad antitumoral frente a distintas líneas celulares tumorales.

En estudios previos hemos visto que existe una microbiota que se asocia específicamente a la túnica de la ascidia, que es el tejido común que envuelve a cada uno de los zooides de la colonia. Estacomunidad asociada se compone de distintos filotipos todos ellos pertenecientes al grupo de Alfa Proteobacterias. Además hemos visto que toda la comunidad se transmite verticalmente a la larva de la ascidia, y se asocia al tejido indiferenciado de la larva denominado compartimento interno, que posteriormente conformará la túnica en la colonia adulta.

A partir del análisis de las secuencias del gen del rRNA 16S encontramos que los microorganismos asociados a la ascidia están filogenéticamente próximos a microorganismos marinos que realizan la fototrofía anoxigénica aerobia, tales como el género Roseobacter sp. y Erythrobacter sp.

El operon puf está compuesto por genes (pufB, pufA, pufL y pufM)que codifican a subunidades que componen el complejo de captación de la luzen la fototrofía anoxigénica aerobia. El gen pufM codifica a una de las proteínas que componen el centro de reacción.

En el presente trabajo se pretende estudiar si los microorganismos asociados realizan la fototrofía anoxigénica aerobia tanto en el adulto como en la larva de Cystodytes dellechiajei.

Para ello se procedió a la construcción de cuatro genotecas del gen pufM, dosgenotecas de la colonia y la larva a partir de muestras de ácidos nucleicos totales amplificados por PCR, y dos genotecas de la colonia y larva construidas a partir de muestras de RNA amplificados por RT-PCR. Para las reacciones de PCR y RT-PCR se emplearon cebadores específicos.

Se analizaron 30 clones de cada una de las genotecas. Tanto en las genotecas de la larva construida a partir de amplificación por PCR y RT-PCR, como en las genotecas de la colonia construida a partir de amplificación por PCR y RT-PCR encontramos 8 secuencias distintas del gen pufM de microorganismos relacionados con el género Roseobacter sp., Erythrobacter sp., Roseateles sp., Rhodovulum sp., Rhodospirillum sp. y Rhodopseudomonas sp., con porcentajes de similitud del BLASTx mayores del 90%.

Así por tanto, de los resultados del análisis de las genotecas podemos concluir que los microorganismos asociados a la ascidia Cystodytes dellechiajei poseen el gen pufM relacionado con la fotótrofía anoxigénica aerobia y que además están expresando dicho gen tanto en la fase adulta de la ascidia como en la larva.